谷胱甘肽生物转化研究.docx

生物转化法合成谷胱甘肽的研究
张磊 薛钊坤
（浙江产业大学生物与情况工程学院 杭州 310014）
摘要：本文以编号X23的藤黄八叠球菌为研究工具，研究其生物转化合成谷胱甘肽的可能性。通过从物理、化学和生物938年颁发了由酵母备制谷胱甘肽的最早专利以来[3]，还原型谷胱甘肽在临床上有着遍及的应用，它能够防备皮肤色素沉积、改进皮肤光芒，是治疗肝病、重金属中毒、放射性损伤、肿瘤、白内障等疾病的有效药物
，最近还发明谷胱甘肽可能具有抗艾滋病毒的成果。谷胱甘肽现在已遍及运用于食品加工的各个领域，在日本谷胱甘肽被认为是21世纪最有希望的保健食品之一。谷胱甘肽作为一种重要的氨基酸类生化药物，随着人们在食品添加剂、临床医学和运动营养学上对它的兴趣日益增长，市场需求量不停增加。
目前生产谷胱甘肽最普遍的要领是发酵法生产，发酵法生产谷胱甘肽根本以酵母发酵为主，海内外尚未见到以革蓝氏阳性菌产生的酶系催化合成谷胱甘肽的报道，本课题旨在弥补这一空白。由于GSH合成酶在细菌体内的活性和产量受细菌调控，因此要提高转化率一个重要途径是优化生物转化条件。本论文通过一定要领提取细菌中相应的活性酶，研究其最适转化条件和最佳配方以提高谷胱甘肽的生物转化率。由于藤黄八叠菌的生长周期仅为酵母的1/3，利用该细菌高产谷胱甘肽合成酶菌株进行转化法生产谷胱甘肽，可以大大缩短生产周期提高经济效益，促进财产化生产。
1 质料与仪器
菌种来源
藤黄八叠球菌（浙江产业大学生物实验室收集和收藏）
培养基
斜面培养基（完全培养基）及培养条件[2]：培养基：葡萄糖30g、卵白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠 5g、琼脂20g定容至1L水。pH自然，×105Pa 灭菌20min。
种子培养基及培养条件：葡萄糖30g、卵白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠 5g、定容到1L， pH自然，×105Pa 灭菌20min。
发酵培养及培养条件：培养基：糖蜜30g、白胨25g、七水硫酸镁 5g、 磷酸二氢镁 1g cysHCl ,加水定容1000ml ,×105Pa、灭菌 20min。
TL0转化液配方[1]
转化液TL0：pH ，K2HPO4-KH2PO4缓冲液，葡萄糖9g/L，MgCl2 ，（，，）。
主要仪器：
LS-B50L立式蒸汽灭菌锅，上海医用核子仪器厂；751-GW，分光光度计,上海阐发仪器厂；高速离心机LD5-10；超声波破坏机（CPS-IA）上海超声波仪器厂，摇床（HWY-V11）上海智城阐发仪器厂。
2 实验要领
菌种培养及发酵要领
取实验室收藏的藤黄八叠球菌种，接种于斜面培养基上活化2代后，取2-3代长势良好的菌群，无菌操纵，将菌接于种子液中，30℃摇床转速180r/min，培养20h，将含菌种子液以10%接种量用无菌移液管移取参加新配制的发酵液中，30℃摇床转速180r/min，培养18h。
生物转化要领
将发酵后的发酵液于3500r/min离心后去除上清液，沉淀为湿菌种，加少量TLo转化液用超