《高效液相色谱法b》.ppt

第三节 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理
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一、液－液色谱法（或称液－液分配色谱法）
分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
(一)固定相
载体+固定液（物理或机械涂渍法）
缺点：系统内部压力大，易流失利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异
分离前提：K不等或k不等
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2、固定相：与LC比，固定相粒径不同（<10μm） （1）硅胶 表面多孔型（薄壳硅胶） 全多孔型 无定形 YWG 5~6μm 5×104 球形 YQG 3~4μm 8×108  堆积硅珠 YQG 3~4 μm 8×108 理想 原理：吸附 特点：峰易拖尾 适用：分离极性化合物
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（2）高分子多孔小球：YSG
原理：吸附+分配
兼小孔凝胶作用
特点：柱选择性好，峰形好，柱效低
适用：分离弱极性化合物
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3、流动相：底剂（烷烃）+ 有机极性调节剂
例： 正己烷或庚烷 + 氯仿- - -
4、影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关
溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑
溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓， tR↓
注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间
5、出柱顺序：
强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱
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6、硅胶吸水量↑，LSC→LLC
硅胶含水量较小 吸附色谱 硅胶极性较大
硅胶含水量>17% 分配色谱 硅胶失活→载体
吸附的水→固定液
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四、离子交换色谱法（IEC ）
（一）原理
利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离♫ 适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广
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阴离子交换：
一般形式： R一A＋B ＝ R－B＋A
阳离子交换：
待测离子与离子交换树脂固定相上带电荷基团或游离的离子发生可逆交换反应
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（二）固定相
种类
阳离子交换树脂
强酸性
弱酸性
阴离子交换树脂
强碱性
弱碱性
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（三）流动相
通常是盐类的缓冲溶液
改变 流动相的 pH
缓冲剂（平衡离子）的类型
离子强度
加入有机溶剂、配位剂等
常用的缓冲剂有：磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、氨水等
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五、离子对色谱法
离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法。
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离子对形成机理
把和被测物离子A电荷相反的离子B（对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子A与反离子B形成中性离子对AB，该AB离子对的性质与A离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子的保留特性。
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离子对试剂
用于阴离子分离的对离子： 烷基铵类，如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲基铵等
用于阳离子分离的对离子：烷基磺酸类，如己烷磺酸钠
固定相和流动相
性质同键合相色谱，选择不同的离子对试剂可以分离酸、碱和离子、非离子的混合物
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六、离子色谱法
以离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相，通常以电导检测器为通用检测器。
对离子型化合物的分析，离子色谱法是目前唯一能获得快速、灵敏、准确和多组分效果的方法，检测手段已扩展到电导检测器之外的其它类型的检测器，如电化学检测器，紫外光度检测器。可分析的离子从无机和有机阴离子到金属阳离子，从有机阳离子到糖类、氨基酸等均可用离子色谱法进行分析。
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七、空间排阻色谱法
（一）分离原理
凝胶内具有一定大小的孔穴
小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱
中等体积的分子部分渗透
体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出来
固定相为化学惰性多孔物质