《微生物实验》课件PPT教案-微生物细胞大小和数量的测定.pptx

实验五
微生物细胞大小和数 量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
■目的要求
・实验材料
・实验程序
■思考题
目的要求
■学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。
■学数板测定微生物实验五
微生物细胞大小和数 量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
■目的要求
・实验材料
・实验程序
■思考题
目的要求
■学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。
■学数板测定微生物数量的
方法。
实验材料
■显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细
菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、
盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、
香柏油、二甲苯。
实验程序
■测定微生物的大小
■测定微生物数量
实验程序I （测定微生物的大小）
■测定的工具：目镜测微尺镜台测微尺
镜台浏微尺
目後测徹尺
利用目镜测徹尺溺定镜 台测微尺的缶格绝对值
镜台测微尺 测定微生物大小
A
ffl 5-1 a她測微尺（A）、俛台测柢尺（B）及其校正（C）与测量（D）
实验程序II
（测定微生物的大小）
目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后, 转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动 器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后， 仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微 尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长 10gm,所以可得：
目镜测微尺每格长度（pm）=（镜台测微尺格数X1O） /目镜 测微尺格数
注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。
菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物 台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
3： :E
实验程序III
（测定微生物数量）
•方法：活菌计数法一一平板菌落计数法；总菌计数法——血
球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理
和部件相同，只是厚薄不同而已）o
a 5-2血球计数板构造
上:俯视图（中间平台分为两半，各刻有一个方格网） 下:侧面图（中间平台与盖玻片之间有高度为0. 1mm
l/4OOmm2 l/25mm2
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图5 — 3 奸薮网的分区和分格
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实验程序IV 1
（测定微生物数量）
■本实验用血球计数板计数酵母菌的数量
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至 视野中央。
4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均 值，然后求得每个中格的平均值。乘上16 （或25） 就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL 菌液中的含菌咎丄
实验程序IV 2
：
酵母菌细胞数/mL=(X1+X2+X3+X4+X5) x 25 (或 16) X 10 X 1000 x 稀释倍数
6-注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右 侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时， 若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。
，血球计数板要立即清洗干净，并用 吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
思考题
■为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？
■在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？
实
结
验五
束