免疫组化方法和步骤.docx

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免疫组化检测CD34+的表达
1基本原理
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，
通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确心机(BACKMANCS-15R)
抽滤器(AUTOSCIENCEAP-01)
磁力搅拌器(79-1)
上海
江苏江阴科研

德国BM公

1/10000电子天枰(SartoriusAC-211)
细胞培养瓶及细胞培养板(Costar
细胞计数板
光学显微镜(OLYMPUSCK-40)
日本
倒置显微镜(OLYMPUS
日本
日本
切片机:
德国Leica
展片机
德国Leica，HI1210型
德国Leica，HI1220型
3实验方》
抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。
照像系统(OLYMPUSBH-2)
美国Beckman公司
德国BM公司
爭医用仪器厂
：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20〜30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES，置通风橱中晾干即可。用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位，并尽量减少气泡的存在，以免影响染色结果。
:将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的Histogrip液中，停留1~2分钟,然后用双蒸水快速清洗三次，室温干燥或60oC烤箱烘烤一小时，装盒备用。
-L-Lysine：将洗净、干燥的载玻片放入以1:10比例去离子水稀释的多聚赖氨酸溶液
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中，浸泡5分钟，60oC烤箱烘烤一小时或室温过夜干燥。装盒备用。试验中使用的器具均为非玻璃制品。
：
1）胰蛋白酶：%〜%,消化时间为37°C、10〜40分钟，主要用于细胞内抗原的显示。
2）胃蛋白酶：%，消化时间为37C、30~180分钟，主要用于细胞间质抗原的显示，如：Laminin（层粘蛋白）,CollagenIV（IV型胶原）等。
3）皂素（Saponin）：—般使用浓度为2~10g/ml的saponin溶液，消化时I'分钟。

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可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原
原热修复可选用各种缓冲液，如TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明，（）效果最好。
或水浴高温抗原修复。抗
：切水洗2分钟X3。将切片放入盛有枸橼容器内液体温度保持在92C〜98C之间扌波炉，请根据具体机型酌情设置乡器,室温冷却10〜20分钟（注意有的空间构型）。PBS洗
3%H2O2处理10分钟，蒸馏液（工作液）的容器中，置微波炉内加热使10~15分钟（注意：无论是使用医用或家用微，，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求）。取出容将切片从缓冲液中取出冷却，以便使蛋白能够恢复原疫组化染色步骤。
（工作液）注