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蓝白斑筛选
蓝白斑筛选
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。
野生型大: .
蓝白斑筛选
蓝白斑筛选
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。
野生型大肠杆菌产生的B-半乳糖甘酶可以将无色化合物X-gal（5-澳
-4-氯-3-呷咪-B-D-半乳糖甘）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-澳-4-靛
蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。
设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为B-半乳糖甘酶缺陷型菌株。这
种宿主菌的染色体基因组中编码B-半乳糖甘酶的基因突变，造成其编码的
B-半乳糖甘酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽（即a肽链），从
而不具有生物活性，即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选
的载体具有一段称为lacz'的基因，lacz'中包括：一段B-半乳糖甘酶的启动子；编码a肽链的区段；一个多克隆位点（MCS）oMC“：于编码a肽
链的区段中，是外源DNA的选择性插入位点，但其本身不影响载体编码a
肽链的功能活性。虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的B-半乳糖
甘酶，但当菌体中含有带lacz'的质粒后，质粒lacz'基因编码的a肽链
和菌株基因组表达的N端缺陷的B-半乳糖甘酶突变体互补，具有与完整
B-半乳糖甘酶相同的作用X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即“五
补。
操作中，添加IPTG（异丙基硫代-B-D-半乳糖甘
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