测定蛋白酶活力实验.doc

SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-SANYHUASANYUA8Q8-SANYUA1688】
测定蛋白酶活力实验
测定蛋白酶活力实验
一、实验目的
SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-SANYHUASANYUA8Q8-SANYUA1688】
测定蛋白酶活力实验
测定蛋白酶活力实验
一、实验目的
。
。
二、实验原理
酶活力指酶催化某一特定反应的能力。其大小可用在一定条件下酶催化反应进行一定时间后，反应体系中底物的减少量或产物的生成量来表示。
酶活力单位是表示酶活力大小的重要指标。本实验规定酶活力单位(U)为一定条件下每分钟分解1μg酪氨酸所需的酶量。
实验选用枯草杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的反应体系。产物酪氨酸在碱性条件下与Folin-酚试剂反应生成蓝色化合物，该蓝色化合物在680nm处有最大光吸收，其吸光值与酪氨酸含量呈正比。
因此通过测定一定条件下产物酪氨酸的含量变化，可计算出蛋白酶的活力。
三、仪器和试剂
仪器:
恒温水浴锅、分光光度计、试管及试管架、干燥滤纸、玻璃漏斗。
原料
枯草杆菌蛋白酶：称取1g枯草杆菌蛋白酶粉，，，震荡15分钟，使充分溶解，干纱布过滤，取滤液冰箱备用。使用时视酶活力高低用缓冲液适当稀释。
试剂
-酚试剂：
在
2L磨口回流瓶中加入钨酸钠()100g，钼酸钠()25g，蒸馏水700mL，85%磷酸50mL以及浓盐酸100mL，充分混匀后，微火回流加热10小时。再加入硫酸锂150g，蒸馏水50mL和液溴数滴，摇匀后开口继续煮沸15min，以驱赶过剩的溴。冷却后加蒸馏水定容至1000mL，过滤，溶液呈黄绿色，置于棕色试剂瓶中暗处贮藏。使用前用标准NaOH溶液、酚酞为指示剂标定酸度(约为2mol/L)，然后加水稀释至1mol/L，即可使用。
2.


%三氯乙酸溶液
：
称取磷酸氢二钠()，用水定容至100mL(A液)；称取磷酸二氢钠()，用水定容至100mL(B液)。取A液84mL，B液16mL混合后，，可长期存放。临用时稀释10倍即可。
(50μg/mL)：，，蒸馏水定容至250mL。
(%)：称取
，(20mL)溶解，。
四、操作步骤
(一)酪氨酸标准曲线的制作
取6支试管(标号0，1~5)，，，，