猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎三联检测试纸条的制作方法.docx

猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎三联检测试纸条的制作方法
猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎三联检测试纸条的制作方法
本发明涉及一种猪三种疫病的检测试剂显示的器具，特别是涉及一种猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎快速诊断试纸条，试纸条染的家畜主要表现为口、蹄和乳头周围的水疱样损害，产肉量和产奶量下降，一般不引起动物死亡。人感染后出现类似流感的症状，但不会引发水疱。VSV感染牛和猪时，临床症状与口蹄疫、猪水疱病、猪水疱疹不易区别，而且该病使猪的生产能力下降而造成严重的经济损失，并对国际贸易产生严重影响，有着重要的社会经济和公共卫生意义。世界动物卫生组织(OIE)将水疱性口炎(Vesicular stomatitis, VS)列为法定通报传染病。本病毒在7?13日龄鸡胚绒毛尿囊膜上和尿囊腔内均能增殖，并于24?48小时时内致死鸡胚。还能在多种动物的肾或上皮原代细胞和多种传代细胞培养中良好地增殖，并产生细胞病变。传播途径主要是损伤的皮肤和粘膜，在猪群中主要以接触方式传播，而不是经消化道感染。
双翅目昆虫是本病的重要传播媒介，白蛉、伊蚊和螨都分离到本病毒。通过人工接种可使包括实验动物在内的各种动物发病。自然感染时潜伏期为2?5天，而人工感染多为I天。病初体温升高40?41°C，精神沉郁，食欲减退和流涎。病猪鼻部水疱较为常见，蹄部水疱多发于蹄叉而少见于蹄冠部，内含黄色透明液体。水疱破裂后显露溃疡面，病猪站立困难，并出现跋灯。
[0005]这三种病的临床症状临床症状相似，鉴别诊断困难，给此类疾病的控制带来了难度。快速鉴别检测可为发病猪群的治疗和病原体的清除提供科学依据，是控制和消灭上述疾病的有效方法。目前对上述疾病的诊断方法主要有以下几种。
[0006](I)病毒的分离培养:取典型的水疱组织及其液体匀浆稀释后，加抗菌素4°C作用4小时，，滤液接种于铺满单层的猪肾传代细胞或猪肾细胞原代细胞上，37°C吸附I小时，加维持液继续培养48?72小时观察细胞病变。
[0007](2)动物接种试验:，滤液分别接种于不同日龄乳鼠。连续观察记录乳鼠的死亡情况。根据乳鼠的死亡情况判定是否为猪水疱病、水疱性口炎、猪水疱性疹。
[0008](3)血清学检测:反向间接血凝试验，可用戍二醛一甲醛固定绵羊红细胞并以豚鼠抗水疱病抗体致敏，制成敏化红细胞诊断液，诊断液与待检抗原(水疱液或水疱皮)进行反向间接血凝试验，2?7小时可得出结果。中和试验，取I?2日龄乳鼠8只，试验组和对照组各4只，试验组用抗水疱病血清与被检材料(病料研碎用生理盐水制成1:5稀释液，每毫升加双抗，置4°C冰箱浸毒6小时，取上清液)即上述浸出液等量混合，对照组用生理盐水代替抗血清，置37°C温箱中作用I小时，，如对照组乳鼠全部死亡，而试验组乳鼠存活即证明该检样中含备检病毒；或取标准阳性血清和无菌水疱液，采用微量血清中和法，在BHK-21传代细胞上进行中和试验，能够被标准阳性血清中和，细胞不发生病变者，判为阳性。琼扩试验，本法用于检查水疱病疑似猪血清中的特异性抗体。凡能与标准抗原发生反应，产生明显沉淀线者即可确诊。
[0009](4)反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术:RT_PCR技术具有高灵敏度、高特异性等优点，