油镜及荧光显微镜的原理及使用方法演示文稿.ppt

油镜及荧光显微镜的原理及使用方法演示文稿
第一页，共二十一页。
优选油镜及荧光显微镜的原理及使用方法
第二页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
光学显微镜注意事项
荧光显油镜及荧光显微镜的原理及使用方法演示文稿
第一页，共二十一页。
优选油镜及荧光显微镜的原理及使用方法
第二页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
光学显微镜注意事项
荧光显微镜的使用原理
1
2
3
第三页，共二十一页。
光学显微镜
光学显微镜（Optical Microscope，简写OM）是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。
第四页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
低、高倍镜观察
进一步放大的部分移到视野的中心
第五页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
集光器上升到最高位置
光圈开到最大
第六页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离
高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油
第七页，共二十一页。
光学显微镜的使用方法
用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。
不出现物象 目标不理想
加油区外
加油区内
低倍→高倍→油镜
低倍→油镜
油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
第八页，共二十一页。
光学显微镜注意事项
、左手托座的姿势；
、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台， 如果沾污应立即擦净；
，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜； 
，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏；
，必须复原才能放回镜箱内。
第九页，共二十一页。
荧光显微镜的使用原理
第十页，共二十一页。
什么是荧光？
概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。
即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
自发性荧光
分类
诱发性荧光
细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光
细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光
一般很微弱，如叶绿素。
如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。
第十一页，共二十一页。
荧光显微镜
荧光显微镜(Fluorescence microscope) 是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
第十二页，共二十一页。
第十三页，共二十一页。
多采用200W的超高压汞灯作光源。
原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。
作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。
注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。
汞灯光源
第十四页，共二十一页。
激发滤板
紫外光激发滤板
紫 外蓝光激发滤板
400nm
紫外光
紫蓝光激发滤板
400nm
可见光
300-450nm
光
350-490nm
光
根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。
第十五页，共二十一页。
分光镜
分光镜反射短波，透射长波。
短波激发光在分光镜处反射，由物镜到荧光物质，产生的长波长发射光经物镜返回，并透过分光镜。
第十六页，共二十一页。
压制滤板
压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。
紫外光压制滤板
紫 外蓝光压制滤板
紫蓝光压制滤板
可见光
紫外光
>510nm
>460nm
第十七页，共二十一页。
荧光显微镜的种类 落射式 透射式
第十八页，共二十一页。
荧光显微镜的主要部件
透射式
汞灯光源
激发滤版
暗场聚光镜
压制滤版
落射式
汞灯光源
激发滤版
分光镜
压制滤版
第十九页，共二十一页。