微生物的大小及数量的测定.docx

微生物的大小及数量的测定实验目的了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数）取一滴酵母菌菌悬:液制成水浸片。
2）移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高
倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等丁该菌的长和宽。
）将载玻片洗净晾干后，在其中央滴一滴蒸僻水，然后通过无菌操作用接种针取少量枯草芽抱杆菌的斜面培养物丁蒸僻水中，然后干燥2）单染色用结晶紫染液或美兰染液对其进行单染色，染色一定时间后冲洗载玻片的背面，将染液冲洗掉3）置丁显微镜下镜检，用目镜测微尺测量枯草芽抱杆菌的长和宽注意事项
测量菌体大小时要在同一个标本片上测定3个大小相近的菌体，求出平■均值,才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。
酵母菌菌悬液中酵母菌菌数的测定
（1）取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。
（2）将酵母菌菌悬液充分摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的右上角滴入一小滴（不宜过多），使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。
（3）先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。
（4）计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格（即100小格）的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数（即80小格）。由丁菌体在计数室中处丁不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位丁中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
（5）凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品
重复分数2-3次（每次数值不应招差过大，否则应重新操作），取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数（25中格）。
X】*X，十Xm+Xi十％酵母菌地胞S/mL=心5（或ItT）10xlOODx稀粹倍数
5（6）血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，可以用去污粉洗净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。
五、实验结果1、目镜测微尺的标定结果
物镜倍数
（目镜均为10倍）
目镜测微尺的格数
（小格）
镜台测微尺的格数
（小格）
目镜测微尺的每格的
长度（11m）
10倍
100


40倍
100


100倍
100


2、酵母菌的大小测定结果（10X100）
菌号
1
2
3
平均值
目镜测微尺的格数
长轴
13
12
12

（小格）
短轴
9
9
10

酵母大小平■均值=（长轴）（短轴）m23、枯草芽抱杆菌大小测定结果（10X100）
菌号
1
2
3
平均值
目镜测微尺的格数