发酵工程实验报告.docx

YUNNAN NORMAL UNIVERSITY
发酵工程学实验
组号： 7-8节第七小组 学号： 124120434
学院： 生命科学学院 专业、班级:12生物技术
实验课程名称
指导教师及职称 唐湘华
开课学期 201相同接种量（约5%，即 ）相同培养条件下（30°C, 60h）发酵，测定酶活。
3、 碳源的选择和选择的碳源添加量对产酶的影响（第二组）
选择果胶、葡萄糖、橘子粉按照1%浓度替换发酵培养基中的蛋白胨，接种 5%液体种子，培养48小时，测定酶活。在液体发酵培养基中分别添加0、%、 、2%、3.%的选择的碳源，保持培养基的其它成分不变，在相同条件下 接种液体种子（约5%，），相同培养条件下，30C，发酵60h，测 定酶活。
4、 培养基含水量对产酶的影响（第三组）
在发酵培养基中加入蒸馏水，使培养基中的含水量分别约为50%、55%、60%、 65%和70%；保持培养基的其它成分不变，在相同接种量（5%， ） 相同培养条件下（30C，48~60h）发酵，测定酶活。
5、 接种量对产酶的影响 （第三组）
分别以4%、5%、6%、7%和8%的接种量接种果胶酶产生菌于发酵培养基中， 在相同的培养条件下（30C，48~60h）发酵，测定酶活。
注意：由于接种的是液体菌种，所以在配制培养基时要将接种时多出的水分 去掉。
6、 发酵时间对产酶的影响（第四组）
在相同的培养基、相同的接种量（5%， ）和相同培养条件下（30C） 分别发酵36、48、60、72和84h，测定酶活。
注意：精确计算时间，准时取出发酵产物。
7、 发酵温度对产酶的影响 （第五组）
保持培养基成分和接种量（5%， ）不变，分别
在室温、30、37和45°C的温度条件下发酵48—60h，
测定酶活。
先把培养箱调到相应的温度！
8、果胶酶酶活的测定
（1）待测酶液的制备
烘干：把发酵产物倒于平皿中，45C烘干过夜；
制备酶粉：将烘干的发酵产物用研钵研磨成粉状（尽量磨细），装于塑料袋 中备用；
制备酶液：，充分溶解于10mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（稀 释100倍），纱布（4层）过滤去除杂质；
如果测定所得OD值不在有效值（-）范围内，则相应地降低或增大稀 释倍数后再进行测定。
（2）果胶酶酶活测定方法
操作步骤
空白管
样品管A
样品管B
步骤1
吸取1. 8mL果胶底物溶液
吸取1. 8mL果胶底物溶液
吸取1. 8mL果胶底 物溶液
步骤2
37 °C保温5分钟
37 V保温5分钟
37 "C保温5分钟
步骤3
加入待测酶液0. 2毫升
加入待测酶液0. 2 毫升
步骤4
37 °C精确保温30inin
37°（2精确保温30111：111
37°C精确保温 30m in
步骤5
加入3mLDNS试剂终止反 应
加入3inLDNS试剂终止反 应
加入3mLDNS试剂 终止反应
步骤6
混合均匀
混合均匀
混合均匀
步骤7
加入0. 2毫升待测酶液， 沸水浴煮沸5min
沸水浴煮沸5min
沸水浴煮沸5min
步骤8
-
流水冷却
流水冷却
流水冷却
—^<9—
加杰俺水15mL,混匀
加杰俺水15mL?混匀
加杰憎水15mL?
混匀
步骤10
0D540nm 比色
0D540nm 比色
0D540nm 比色
OD = （A+B） / 2
酶活定义：、37^条件下，每分钟内从底物溶液中分解释放Irmol
半乳糖醛酸所需要的酶量为一个酶活单位U/g。
酶活计算公式
酶活（U/g）=Ax5xKxNx1000/（TxWxM）
A: 样品的OD值（平均值）
K: 标准曲线的斜率
N: 稀释倍数
5：
T: 反应时间（min）
1000：转换因子 1mmol=1000pmol
W: 半乳糖醛酸的分子量（）
M: 称取酶粉克数（g）
绘制标准曲线的方法
先配制一系列浓度不同的标准溶液，用选定的显色剂进行显色，在一定波长 下分别测定它们的吸光度A。
以A为横坐标，浓度c为纵坐标，则得到一条拟合度较好的直线，称为标准 曲线。
然后使用用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，便可从标准曲线 上找出对应的被测溶液浓度或含量。
半乳糖醛酸标准曲线的制作
，用缓冲溶液定容至100ml，制得浓度为1mg/ml
的半乳糖醛酸的标准溶液。标准曲线如下图表所示
半乳糖醛酸溶液 体积(ml)
0.