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一种简便快速检测l-半胱氨酸的方法
一种简便快速检测l-半胱氨酸的方法
本发明公开了一种快速简单检测L-半胱氨酸的紫外比色方法。该方法基于L-半胱氨酸与1-氯-2,4-二硝基苯在沸水浴中快速生成黄色络合物，并且十六烷基三甲基溴化铵可加速光法、催化动力学方法及荧光方法为主，操作复杂、灵敏度不高、选择性较差。该反应利用L-半胱氨酸与1-氯_2，4- 二硝基苯在沸水浴中发生亲核取代反应，快速检测L-半胱氨酸，具有检测速度快、费用低、操作步骤简单、肉眼可视等优点，为现场快速灵敏检测L-半胱氨酸提供了新的技术手段。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1为本发明实施例提供的在十六烷基三甲基溴化铵催化下L-半胱氨酸与1-氯-2，4- 二硝基苯在沸水浴中发生亲核取代反应前后溶液的颜色变化原理图，A为反应前溶液颜色，B为反应后溶液颜色。
[0024]图2为本发明实施例提供的在十六烷基三甲基溴化铵催化下不同浓度的L-半胱氨酸与1-氯_2，4- 二硝基苯在沸水浴中发生亲核取代反应前后溶液的颜色变化图，其中 L-半胱氨酸的浓度分别为 1:100 μ M，2:80 μ Μ，3:60 μ Μ，4:40 μ Μ，5:20 μ Μ，6:10μΜ,7:0 μ Μ。
[0025]图3为本发明实施例提供的测定L-半胱氨酸的标准曲线及线性范围，其中，-40 μ Μ，。
[0026]图4为本发明实施例提供的检测L-半胱氨酸的特异性效果图；其中0-10分别为:空白对照(不含任何氨基酸)，100 μ M的L-半胱氨酸，100 μ M的色氨酸，ImM的甘氨酸，谷氨酸，赖氨酸，苏氨酸，精氨酸，丝氨酸，脯氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸。
[0027]图5为本发明实施例提供的检测流程图。
[0028] 【具体实施方式】
[0029]实施例1:猪肝脏中L-半胱氨酸的浓度测定。
[0030](I)样品的获取:取新鲜猪肝脏
[0031](2)样品前处理:将2g样品用组织剪剪碎，放入IOml的小瓶中，然后加入去离子水将体积补足到10ml，然后用匀浆器匀浆。将匀浆液中加入与其相同体积的乙醇，去除蛋白质及其它杂质，充分混分后10000转/分钟离心10分钟，取上清液。 μ m的滤膜过滤，将滤液稀释10倍，待用。
[0032](3)取待测样800 μ I中加入100 μ I A液。
[0033](4)在步骤(3)中所得液体加入15 μ I B液与5μ1 C液，在沸水浴条件下反应5min。
[0034](5)浓度调试:若步骤(4)得到的反应液颜色过黄，可将待测样适度稀释后测定。
[0035](6)样液中L-半胱氨酸浓度的计算:在紫外分光光度计中测定，获得数据与标准曲线比对，计算出反应液中的L-半胱氨酸浓度(参见图4和图5 )。
[0036](7)将以上步骤反复三次。
[0037](8)最终该反法的测试样结果为:± μ M0
[0038](9)根据稀释浓度，实际样中L-半胱氨酸浓度为:146±53 μ M (参见表I)。
[0039]所述A液为:， ；Β液为:；C液为:72mM的1-氯-2，4- 二硝基苯的乙醇溶液。
[0040]