植物DNA提取方法.pdf

实验方法
茶花基因组 DNA 的提取
采用 CTAB 法[8]提取 DNA，所有试剂（有机溶剂除外）和器皿都经高压灭菌，主要步
骤如下：
（1）取两片幼嫩新鲜叶 40 个循环
延 伸 72℃ 1min30s
继续延伸 72℃ 10 min
保 存 4℃

PCR 扩增产物检测
取扩增产物与 6×loadingbuffer混匀，在 %的琼脂糖凝胶上电泳，缓冲液为 ×TBE,
电压 5V/cm,电泳 -,取出凝胶在成像系统中拍照并保存结果。

数据处理及 RAPD 分析
得出清晰，亮度较好的条带后，用laberworkers软件分析所得条带，在同一位点重复出现条
带的记为“1”（包括弱带），不出现条带的记为“0” [9]，并分析扩增条带的长度。将生成
的数据输入电子表格，用NTSYSpc21软件分析得出据类图和遗传相似系数和遗传距离。其
中相似系数[10]为: s= [ 2M xy/(M x + M y ) ] ×100% (s表示相似系数,M xy 表示品种x、y 共
段总和 ,M x 表示x 品种片数段 ,M y 表示y 品种片数段 ) ,遗传距离Ｄ＝１-Ｆ。2 结果与分析
基因组 DNA提取
提取的DNA经分光光度计测定，其OD ,DNA含量如下：
260/280

表 2 基因组 DNAOD ,DNA含量。
260/280
Table2 Results of DNA extraction from leaves of 15 Camellia samples
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茶花品种 OD 含量 ug/ml DNA
260/280
Camellia species DNA content
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杜鹃茶（Dujuancha）
凹脉（Ao′mai）