DBXM1302020毛葱洋葱黄矮病毒检测实时荧光RTPCR法.doc

ICS 65. 020
B 05
DB22
吉 林 省 地 方 标 准
DB 22/ XXXXX—2020
毛葱洋葱黄矮病毒检测-实时荧光RT-PCR
法
Detection of onion yellow dwarf virICS 65. 020
B 05
DB22
吉 林 省 地 方 标 准
DB 22/ XXXXX—2020
毛葱洋葱黄矮病毒检测-实时荧光RT-PCR
法
Detection of onion yellow dwarf virus by real-time RT-PCR on Shallot
（送审稿）
xxxx - XX - XX 实施
xxxx - XX - XX 发布
吉林省市场监督管理厅
» r —i—
刖 5
本文件按照GB/T 1. 1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。
本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。
本文件起草单位：吉林省农业科学院。
本文件主要起草人：李小宇，张春雨，王海鹏，王永志，苏颖，李建平，张金花，杨阳，于红。
毛葱洋葱黄矮病毒检测-实时荧光RT-PCR法
1范围
本文件规定了毛葱洋葱黄矮病毒实时荧光RT-PCR检测方法所需的试剂、仪器设备、样品、试验步骤 以及试验数据处理。
本文件适用于毛葱植株、种苗及鳞茎中洋葱黄矮病毒的快速检测、诊断。
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
1
实时荧光 RT-PCR real-time RT-PCR
是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。
2
反转录 reverse transcr i pt ion
反转录是以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。

Ct 值 CT va I ue
PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。
4试剂
1 Trizol核酸提取试剂盒：赛默飞世尔科技（中国）有限公司，货号：15596-026o
：宝生物工程（大连）有限公司，货号：6210A。
：康为世纪生物科技有限公司，货号：CW3008M （5 mL）。
5仪器设备
1实时荧光PCR仪。
。
5. 3电子天平：感量0. 01克。
：离心力12000 g以上。
：0. 1微升〜，〜10微升，2微升〜20微升，5微升〜50 微升，10微升〜100微升，20微升〜200微升，100微升〜1000微升。
5. 6恒温水浴锅。
5. 7 冰箱：2 °C 〜4 °C, -20 °C, -80 °C。
DEPC处理的1. 5毫升离心管，实时荧光PCR反应管。
：10微升，200微升，1000微升。
6样品
1样品采集
采集长度15厘米〜20厘米的管状叶，或地下鳞茎，装入密封袋，置于冰盒中，实验室内4 °C保 存不超过12小时，也可-80 °C长期保存。

用己知含有洋葱黄矮病毒的样品作为阳性