《南医微生物实验》.ppt

微生物与免疫学试验（二）
整理ppt
实验内容
1、录像：免疫标记技术
2、介绍：血清学反应
3、示教：单扩、双扩、火箭电泳、
对流免疫电泳、淋转、E花环
4、操作：玻片凝集
微生物与免疫学试验（二）
整理ppt
实验内容
1、录像：免疫标记技术
2、介绍：血清学反应
3、示教：单扩、双扩、火箭电泳、
对流免疫电泳、淋转、E花环
4、操作：玻片凝集
整理ppt
血清学反应
★抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，在外界条件影响下呈现肉眼可见的反应。实验所用抗体通常存在于血清中，故名。
整理ppt
特异性
可逆性
结合物的可见性与带现象
前带现象：抗体过剩 后带现象：抗原过剩 比例适当：较大的晶格状
免疫复合物
★特点（抗原抗体反应的特点）
整理ppt
抗原抗体反应的影响因素
浓度与比例
电解质
温度
酸碱度
整理ppt
★血清学反应的种类
1）凝集反应（agglutination）
2）沉淀反应（precipitation）
3）补体结合试验（complement fixation test, CFT）
4）中和反应（neutralization）
5）免疫标记技术
整理ppt
抗原的分类与抗原抗体反应的分类
颗粒性抗原
凝集反应
可溶性抗原
沉淀反应
整理ppt
（一）凝集反应
颗粒性抗原
可溶性抗原＋载体（与免疫无关）
直接凝集反应：玻片法：定性，测抗原
试管法（肥达试验）：半定量，测抗体
间接凝集反应
间接凝集抑制试验
整理ppt
整理ppt
（二）沉淀反应
概念：可溶性抗原 + 抗体 沉淀物
单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验
抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）
双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、
抗原定性试验等
抗原、抗体同时扩散（自由、定向）
整理ppt
单向琼脂扩散
单向琼脂扩散试验是一种定量试验。
将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。
主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量
整理ppt
整理ppt
单向定量免疫电泳（火箭电泳）
将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。
敏感度与单扩相仿，但需时较短。
整理ppt
整理ppt
双向琼脂扩散
在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。
可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分
整理ppt
整理ppt
对流免疫电泳
打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。
加样：抗血清加于抗体孔内；待测抗原、阳性、阴性对照抗原分别加于抗原孔内
电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端，抗体孔置阳极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电30分钟。
结果：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。
整理ppt
整理ppt
（三）补体结合试验
方法：
待检系统：Ag（未知）+Ab（已知）+补体
指示系统：绵羊红细胞（Ag）＋溶血素（Ab）
结果：溶血——阴性
不溶血——阳性
整理ppt
（四）中和反应（neutralization）
病毒中和试验
毒素中和试验
整理ppt
（五）免疫标记技术
将已知抗体或抗原标记显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。
常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等
整理ppt
淋巴细胞转化试验
转化百分率正常值为70%左右
分裂相：即染色体型
母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡
过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡
小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少
整理ppt
整理ppt
E玫瑰花环试验
T细胞表面有绵羊红