血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报告.docx

南方升女蚩生物化学实验报告姓名:
学号:
专业年级:
组另U：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定虽实验日期实验地点
合作者
指导老师
评分教师签名
批改日期
一、实验目的学习醋南方升女蚩生物化学实验报告姓名:
学号:
专业年级:
组另U：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定虽实验日期实验地点
合作者
指导老师
评分教师签名
批改日期
一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；了解电泳技术的一般原理；掌握电泳分离血活蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理
血活中各种蛋白质的等电点不同，。，在电场中向正极移动。由丁血活中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为活蛋
白（Albumin）、a1-球蛋白、a2-球蛋白、6-球蛋白、丫-球蛋白5条区带。
血活中不同蛋白质的等电点、分子量及含量
血活蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的％
清蛋白

69,000
57〜72
a1—球蛋白

200,000
2〜5
o（2一球蛋白

300,000
4〜9
6一球蛋白

90,000〜150,000
〜12
Y一球蛋白
〜
156,000〜950,000
12〜20
缓冲液pH=,pl<pH。
血活蛋白带负电荷，在电场中向正极移动预测血活蛋白电泳区带图血活蛋白依次分为活蛋白，球蛋白的a1、a2、6、丫五个区带
AlbalRT原点
①膜条经过氨基黑10B染色后显出活晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶丁碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的白分数。
三、材料与方法：
实验材料：
实验试剂：①样品：健康人血活（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（,）;③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：。
实验器材：①V-1100分光光度计（X1）；②包温水浴箱（X1）；③试管（X6）、试管架（X1）；④1000山加样枪（X1）、加样枪架（X1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm,厚度120pm）;⑥培养也（X5）;⑦点样器或载玻片（X1）；⑧平头镶子（X2）;⑨剪刀（X1）；⑩电泳槽（X1）；?直流稳压电泳仪（X1）实验步骤
/：①取2X8cm的膜条；②；③充/分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上
薄层血活；⑥垂直点样。
波纸桥
滤纸桥电极槽支架Word文档醋酸纤维素薄膜条；③平衡五分钟；④通电（调节电压120v/电流，时间：45~60min）;③关闭电源电泳槽解剖图:
、漂洗：①通电完毕；②取出膜条；③浸丁染色液（氨基黑10B）中，5min；七④取出膜条，浸丁漂洗液；⑤反复漂洗2次，直至漂净；⑥滤纸吸干薄膜。
注意：点样线尽量点得细窄而均匀。
：①放置膜条（