高效液相色谱法测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量研究.doc

1 高效液相色谱法测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量研究【关键词】白癜风颗粒;补骨脂素;异补骨脂素;色谱法,高压液相白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等 15 味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑, 驱风止痒之功效,在本院皮肤科应用多年,证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量, 保证临床用药效果, 本实验建立了 HPLC 测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高, 回收率和精密度好, 结果满意。 1 仪器与试剂 Waters600 高效液相色谱仪, Waters2487 紫外、可见波长检测器; Breeze 色谱工作站; 十万分之一微量分析天平; 补骨脂素对照品(110730-200309) 和异补骨脂素对照品(0738-200108) 购自中国药品生物制品检定所; 甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯,白癜风颗粒由本院自制。 2 方法与结果 色谱条件[1] 色谱柱, ( × 250mm ,5μ m) ; 2 流动相: 甲醇-水(47 ∶ 53) ; 流速, ; 检测波长, 245nm ; 柱温:室温。 对照品溶液的制备精密称取补骨脂素对照品 , 异补骨脂素 ,置 10mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取 ,置 100mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。 供试品溶液的制备取本品粉末约 , 精密称定, 置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 25mL ,密塞,称定重量,超声处理 30min , 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 阴性对照品溶液的制备按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂, 按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察: 精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液 2、4、6、8、 10μL, 分别注入液相色谱仪, 测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得回归方程: Y= × 103+ × 106X,r= 。结果表明, 补骨脂素在 264 ~ 30μg 有良好的线性关系,异补骨脂素在 76~ 80μg 具有良好的线性关系。 精密度实验精密吸取同一供试品溶液( 批号: 050502)5 3 μL, 重复进样 6次, 分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数,结果其 RSD 分别为 % 和 % 。 稳定性试验精密吸取对照品溶液 5μL ,分别于 0,2,4,24,36 h 测定峰面积,计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的 RS D 分别为 % 和 %, 表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在 36h 稳