高效液相色谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的方法分析.doc

1 高效液相色谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的方法分析作者:翟丽段漓童郭瑞华吴来娣【摘要】目的建立以高效液相色谱( HPLC )法测定双黄连注射剂中组分含量的方法。方法以甲醇-水( 10% 的磷酸溶液调节 pH 至 )为流动相,流速为 ml/min ,检测波长为 326 nm ,在 Diamonsil ( 钻石) C18 (5μ m, mm × 150 mm) 色谱柱上洗脱,外标法定量,黄芩苷含量可测定。结果黄芩苷在 ~ μ g/m l 范围内呈良好的线性关系, r= 8, 平均加样回收率为 % , RSD= %(n=5 )。结论该方法简便, 灵敏, 重复性好, 结果准确, 精密度较高, 线性关系良好,回收率也较高,测定结果显示 12h 内黄芩苷稳定, 适合于双黄连注射剂的质量控制。【关键词】双黄连注射剂黄芩苷高效液相色谱法双黄连注射剂是近年来研制的中药制剂,在临床上主要用于急性上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎、肺炎 2 及急性尿路感染等,其疗效确切,安全,应用十分广泛。双黄连注射剂由金银花、黄芩、连翘 3 味中药提取制成, 主要成分为黄芩苷、绿原酸、连翘苷等[1]。药理学研究已证实黄芩苷具有抑菌、清热、降压、镇静、利尿、利胆、抗炎、抗变态反应、解毒等作用; 绿原酸具抗菌消炎、清热解毒等作用;而连翘苷则具有较强的抑菌、抗病毒的活性。双黄连注射剂黄芩苷含量测定的方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、紫外分光光度法等,高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快且精准等特点, 适合中药成分的多样性及复杂性,在双黄连制剂的质量控制上应用也最多。本文通过优化色谱条件测定黄芩苷的含量, 以期为进一步研究双黄连注射剂中绿原酸及其它成分打下基础, 为双黄连注射剂工艺研究和质量控制提供理论基础。 1 仪器与试剂 仪器 Agilent 110 0 高效液相色谱仪(美国 Agilen t 公司); TU - 1800 紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责公司); KQ - 100 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司); 电子天平(上海精科天平) ;予华 SHZ -D(Ⅲ)循环水式真空泵(河南省巩义市英峪予华仪器厂); Diamonsil 3 (钻石) C18 色谱柱( 5μm, mm × 150 mm : 9990 : 8011571 Dikma Technologies )。 试剂双黄连注射液( 批号 Z23021166 黑龙江乌苏里江佳大制药有限公司) ;黄芩苷化学标准品(批号 110715 - 200514, 中国药品生物制品检定所); 色谱甲醇( 天津大茂化学试剂厂); 分析纯甲醇( 天津市北方天医化学试剂厂); 磷酸(河北省保定化学试剂厂)。 2 方法与结果 色谱条件 Diamonsil (钻石) C18 色谱柱( 5μm, mm × 150 mm ), 流动相为 A- 甲醇( 色谱纯): B- 蒸馏水( 50∶ 50), 流速为 ml/min , 检测波长为 326 nm , 进样量 20μl。其分离色谱见图 1~2。 溶液的制备 标准品溶液的配制精密称取黄芩苷标准品