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临床基因扩增检验实验室工作规范
为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，特制定本规范。
一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
不能从本区再进入任何”上游”区域，可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的走动。如有加样则应在超净台内进行。打开预处理过的反应混合液时必须防止液体溅出，尤其是在巢式扩增步骤之间。一个简单的方法是在打开反应管前快速离心数秒。可使用体积较小的离心机，因其所占实验台面小，易于用一只手操作，适合于大多数超净台。防潮屏障如石蜡油或轻矿物油也具有防污染作用，但必须注意的是，矿物油本身也可能成为一种持续性的污染源。用过的加样器必须注意活洁
消蠹。
完成操作及每天工作后都必须对实验室台面进行活洁和消蠹，紫外照射方法与前面区域相同。如有溶液溅出，必须处理并作出记录。
（四）扩增产物分析区
下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。
核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板上探针杂交方法（同位素标记或非同位素标记）、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法等。
目前的微孔板上探针杂交方法，PCR-ELISA方法，也有膜上探针杂交方法。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1mol/LHC1中，并且不能在实验室内倾倒，而应至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。
由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有蠹物质如漠化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故应注意实验人员的安全防护。
本区的活洁消蠹和紫外照射方法同前面区域。本区如采用负压条件或减压情况下（如安装排风扇）可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性。
二、临床基因扩增检验实验室质量保证
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩增检验的所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
（—）标本的采集
常用于基因扩增检测的临床标本包括EDT触枸椽酸钠抗凝全血或骨髓、血活或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样本时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采样系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样者的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
玻璃器也在使用前应高压处理，因为玻璃器也常含有不易失活的RN硼。最好是热灭菌，250C烘烤4小时以上可使RNA#永久性失活。
全血和骨髓标本必须进行抗凝处理。EDTAF日枸椽酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素抗凝，因为肝素是Taq酶的强抑制剂，而且在其后的核酸提取步骤中很难去除。
临床用于RNA如HCVRNAf增检测的血标本建议进行抗凝处理，并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA勺降解。如未作抗凝处理，则抽血后，必须在1小时内分离血活。
（二）标本的