高效液相色谱法测定小春花口服液木犀草素含量.doc

高效液相色谱法测定小春花口服液木犀草素含量.doc高效液相色谱法测定小春花口服液木犀草素含量作者:陈敏, 林宇星, 林凌, 庄捷【关键词】木犀草素小春花为阴地蕨科植物阴地蕨 Sceptridium ternatum(Thunb.)Lyon 的带根全草, 为福建民间肝、清热、镇咳和清火、明目、解毒祛风的功效[1 2] 。小春花口服液( 小伏口服液) 是依据民间经验由小春花等药物组成的复方制剂, 具有清肝解热、散风解毒的功效, 实验表明该制剂有抗炎、免疫调节等作用[3 4], 临床用于治疗呼吸系统疾病。笔者对小春花口服液主要有效成分木犀草素进行定性及含量测定, 建立该制剂的质量控制标准。 1 材料与方法 材料 仪器高效液相色谱色谱仪(Focus 型, 美国光谱物理公司), 紫外可见分光光度计(TU 1221 型, 北京普析通用仪器有限公司), 离心机(ABBOTT, 美[(AE240 型,Mettler 仪器(上海) 有限公司], 电热恒温干燥箱(GZX DH 40 45S, 上海跃进医疗器械厂), 三用紫外分析仪(ZF I型, 上海顾村电光仪器厂), 硅胶板(100 mm × 200 mm, 青岛海洋化工厂分厂)。 试药小春花及小春花口服液由福建省立医院药剂科提供。水为重蒸馏水; 乙酸乙酯、苯、甲酸、磷酸、甲醇、石油醚、无水乙醇均为分析纯。对照品为木犀草素标准品( 中国药品生物制品检定所, 批号 111520 200201) 。 方法 样品制备(1) 称取干燥粉碎小春花 5g 于索氏提取器中, 加石油醚(60~90 ℃)100 mL, 回流提取至石油醚无色, 取出晾干。加无水乙醇 100 mL, 回流提取 7 h, 提取液加无水乙醇定容至 50 mL 作为供试品。(2) 取木犀草素标准品适量, 精密称定, 加乙醇溶解, 配成 1 mg/mL 木犀草素对照品。 有效成分薄层色谱鉴别硅胶 G %CMC Na 板 10 cm × 20 cm,105 ℃活化 1 h, 展开剂:苯乙酸乙酯甲酸(8∶ 2∶ ) 。将供试品与对照品点于同一薄层板上, 展开, 晾干, 三用紫外分析仪下(254 nm) 观察供试品与对照品。对应位置均呈较明显的暗斑, 表明供试品中含木犀草素(图 1)。 木犀草素含量测定( 反相高效液相色谱法) 色谱条件色谱柱为 Ym × mm,5 μ m); 流动相由 % 磷酸缓冲液(pH 3) 甲醇(50 ∶ 50) 组成, 流速 1 mL/min, 柱温 25℃, 进样量 10μ L, 紫外检测波长 355 nm 。木犀草素峰保留时间约 15 min 。精密称取木犀草素标准品适量, 配制成浓度为 35μ g/mL 甲醇溶液,分别取 ,,,, mL, 用甲醇定容至 25 mL, 进样(10 μ L) 得色谱图, 绘制标准曲线(图 2)。 色谱和光谱鉴别取供试品 2 mL,10 000 r/min 离心 10 min, 上清液用微孔滤膜( μ m) 滤过, 取续滤液 10μL 进样, 供试品色谱图保留时间约 15 min 处可见木犀草素峰, 并与供试品中其他成分色谱峰