实验一还原糖和总糖含量的测定.pdf

实验一 还原糖和总糖含量的测定
（3,5-二硝基水杨酸比色法）
一．目的
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（1）样品中还原糖的提取：准确称取 3g 使用面粉，放在 100ml 三角瓶中，先以少量蒸
馏水调成糊状，然后加 50ml 蒸馏水，搅匀，置于 50℃恒温水中保温 20min，使还原糖浸出。
过滤，用 20ml 蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取 1g 使用面粉。放在 100ml 的三角瓶中，加入
10ml 6mol/L HCI 及 15ml 蒸馏水，置于水浴中加热水解 30min。待三角瓶中水解液冷却后，
加入 1 滴酚酞指示剂。以 6mol/LNaOH 中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶
及滤纸，将滤纸全部收集砸 100ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取 10ml
定容过的水解液，移入另一 100ml 的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。
（3）显色和比色，取 4 支 25ml 刻度试管，编号，按下表的量操作。
还原糖测定管号 总糖测定管号
操作项目
○1 ○2 Ⅰ Ⅱ
还原糖待测液（ml） 1 1 0 0
总糖待测液（ml） 0 0 1 1
蒸馏水（ml） 0 0 1 1
3,5-水基 杨酸（ ml）
吸光度（A540）
吸光度（A540）平均值
五、注意事项：标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
六、结果处理
（1）由管○1 、○2 吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数