蔷薇组织培养实验方案指导教师: 鲜雪梅姓名: 姚霞组员: 赵芹孟兰凑季思钰班级: 2015 级生物教育组号: 第7组联系电话: ********** 2016 年 12 月 17 号 1. 实验目的 理解并掌握植物组织培养方法的原理。 1,2 理解 MS- 固体培养基的配置和灭菌方法并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用。 1,3 熟悉外植体(蔷薇)材料的预处理, 了解其消毒和接种方法。 2. 实验器材 器材: 天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、电磁炉、干热灭菌箱、镊子,胶头滴管、 PH试纸、酒精灯、干热灭菌器、手术刀、容量瓶×(100ml ) 烧杯×2、玻璃棒×2、组培瓶×20、量筒×2、滤纸×5、培养皿×2 药品:2%次氯酸钠、 75% 酒精,蔗糖、琼脂、大量元素母液(扩大 10 倍)、微量元素母液(扩大 100 倍)、铁盐母液(扩大 100 倍)、有机物母液(扩大50倍)、 NAA 、1mg/L 6-BA 3. 实验原理植物细胞的全能性,即每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。 4. 实验步骤 固体培养基的配制 称取琼脂 8 克,葡萄糖 30 克,加 500 毫升水在铝锅中使之完全溶解,注意防止糊锅。 移取母液依次加入,然后再加入生长调节剂 定容 调节 PH(- ) 培养基分装与封口 培养基灭菌 外植体的灭菌与接种 外植体的选取及预处理选择生长健壮带芽的蔷薇枝条为外植体,用洗衣粉水洗去表面灰尘杂物, 自来水冲洗干净。用灭菌的剪刀将枝条的病虫害部分剪去,剪为 4cm 左右的带腋芽的茎段。洗衣粉水浸泡 10min ,再用自来水冲洗干净。 接种前准备 用75% 乙醇将净化工作台擦洗干净,将接种所用的、工具、培养基等准备好放入工作台。 打开紫外灯和风机至少 20分钟后开始操作。 关闭紫外灯,点燃酒精灯。 外植体的消毒 用无菌水清洗外植体 3次,中途需晃动 取一无菌培养皿,先用 75% 酒精浸没蔷薇茎段并轻摇 10秒进行预消毒 倒出酒精,加入 2%次氯酸钠浸没,轻摇 10分钟 用镊子将外植体取出,放入另一容器中,用无
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