脂肪酶活性试剂盒说明书.docx

货号：MS2402
脂肪酶（LPS ）活性试剂盒说明书
微量法
规格：100管/96样
测定意义：
LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。
LPS广泛的存在于各种生物货号：MS2402
脂肪酶（LPS ）活性试剂盒说明书
微量法
规格：100管/96样
测定意义：
LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。
LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
测定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、 可调式移液枪、甲苯、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体X1瓶，4°C保存。
试剂二：液体X1瓶，室温保存。
试剂三：液体X1瓶，4C保存。
标准品X1瓶，10 Pmol/mL的标准溶液，室温保存。 mL甲苯，充分溶 解。
粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）:试剂一体积（mL）为1： 5~10的比例（， 加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4C离心 40min，取上清置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000： 1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后16000rpm，4°&离心40min，取上清置于冰上待测。
血清：直接检测。
LPS测定操作：
分光光度计预热30min以上，调节波长到710nm，蒸馏水调零。
试剂一和试剂二置于37C水浴预热30min以上。
空白管：，依次加入130p L试剂一 50p L试剂二和20p L蒸馏水，置于37C 震荡反应10 min；加入300p L甲苯，反复震荡混匀10min，25C，4000rpm离心10 min； 小心吸取上层溶液200p 1，，再加50p L试剂三，反复震荡5min； 25C， 4000rpm离心10 min，小心吸取上层溶液150p 1，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm 处测定吸光值。记为A空白管。
测定管：，依次加入130p L试剂一50p L试剂二和20p L上清液，置于37C震 荡反应10min；加入300p L甲苯，反复震荡混匀10min，25C， 4000rpm离心10 min；小心 吸取上层溶液200p 1，，再加50p L试剂三，反复震荡5min； 25C， 4000rpm离心10min，小心吸取上层溶液150^ 1，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处 测定吸光值。记为
A空白管。
标准管：取标准品200p 1，，再加50p L试剂三，反复震荡5min； 25C， 4000rpm离心10min，小心吸取上层溶液150^ 1，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm
处测定吸光值。记为A空白管。
LPS活性计算