远志、苍术炮制工艺优化及其功效成分在线辨识研究.pdf

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测器-电喷雾-离子阱-飞行时间质谱-𝛼-淀粉酶（𝛼-Amylase）-荧光检测
系统（UPLC-PDA-ESI-IT-TOF-𝛼-Amylase-FLD），对酶浓度、流速、缓冲液和温
度条件影响因素进行优化；构建生苍术饮片在线检测方法。
结果 1. 制远志的最佳炮制工艺为远志 200 g，甘草用量 6%，加水 36 倍，煎煮
时间为 40 min；蜜远志的最佳炮制工艺为远志 200 g，炼蜜用量 25%，温度 123℃，
炮制时间为 7 min；麸炒苍术的最佳炮制工艺为苍术 100 g，麸皮用量 25%，炮制
温度 100℃，炮制时间为 17 min。优化的炮制工艺可为远志和苍术相关炮制品的
工艺化参数提供参考。
2. 首次建立了远志在线 UPLC-PDA-ESI-IT-TOF-LOX-FLD 系统，该系统最

万方数据佳条件为：酶浓度 ×104 U/mL，流速 mL/min，磷酸盐缓冲液 mol/mL 的
pH ，温度 45℃。通过该系统检测发现，生远志饮片的 UPLC 中有 36 个色谱
峰显示出具有潜在与 LOX 结合的活性。采用 UPLC-ESI-IT-TOF 联用技术对 36
个色谱峰进行分析，从中鉴定出 36 个化合物的结构，此外还鉴定了其他的 65 个
成分，包括 25 个远志皂苷类，25 个𠮿酮类，32 个寡糖酯类，其中首次从生远志
饮片中 鉴 定 出 9 个 化 合 物 ： guanosine, complanatoside A, eleutheroside E,
leucosceptoside A, neohesperidin, baicalin, wogonon-7-O-glucuronide, saikosaponin A,
chrysosplenetin B。选取其中 12 个潜在的活性小分子进行 SPR 实验，其结果表明
其中 10 个小分子具有与 LOX 较好的结合能力。
3. 首次建立了苍术在线 UPLC-PDA-ESI-IT-TOF-𝛼-Amylase-FLD 系统，该系
统的最佳条件为：酶浓度为 U/mL，流速为 mL/min，磷酸盐缓冲液为
mol/L 的 pH ，温度为 35℃。
结论 研究所得的制远志、蜜远志和麸炒苍术的最佳炮制工艺稳定可靠，其理论
预测值和实验炮制值相符合。首次建立了远志在线 UPLC-PDA-ESI-IT-TOF-LOX-
FLD 系统和苍术在线 UPLC-PDA-ESI-IT-TOF-𝛼-Amylase-FLD 系统。通过该系统
首次从远志中辨识出 36 个与 LOX 结合的潜在活性成分，进一步采用 SPR 实验
技术对其验证，结果表明有 10 个小分子具有与 LOX 较好的结合能力，此外采用
质谱联用技术首次从生远志饮片中鉴定 9 个化合物。本研究建立的两个在线活性
检测系统集成分分离、结构鉴定、活性检测于一体，具有高效灵敏的特点，可为
远志和苍术的功效成分的解析提供科学方法，为阐明远志和苍术相关功效物质基
础提供科学参考，