植物组织培养实验报告精选文档.docx

TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-TTMSHHJ8】
植物组织培养实验报告精选文档
院(系、部) 化学与生物工程学院 专业 生物技术（师范） 年级对形成层的分化具有一定影响，同时还能刺激体细胞胚进一步发育成植株。
实验材料、试剂和仪器设备
植物材料：马齿苋、番茄种子诱导的无菌苗、外植体（盘龙参、波斯菊、金叶女贞、黄花苜蓿、菊花、香樟、杜鹃、月季）
实验药品（试剂）：甲醛、MS培养基母液（见表1）、蔗糖、琼脂、1%升汞、酒精（75%和90%）、NaOH、HCl、6-BA、NNA、无菌水；
仪器设备和实验用具：高压灭菌锅、天平、pH计、超净工作台、电炉、酒精灯、镊子、解剖刀、剪刀、烧杯、培养瓶、量筒、烧杯、玻璃棒、广口试剂瓶、牛皮纸、滤纸、培养皿、药勺、支架、打火机等。
实验步骤
培养基母液的配制(2016/3/4)
MS培养基贮备液配制
贮备液I(g)(20×)
贮备液III(mg) (100×)
MgSO4·7H2O
500mL
FeSO4·7H2O
278
100mL
NH4NO3
Na2EDTA·2H2O
373
CaCl2·2H2O
生长调节剂
KNO3
6-BA
50mg
50mL
KH2PO4
NAA
50mg
贮备液II(mg) )(100×)
贮备液IV(mg) )(100×)
KI

100mL
肌醇
1000
100mL
H3BO3
62
烟酸
5
MnSO4·4H2O
223
盐酸硫胺素
1
ZnSO4·7H2O
86
盐酸吡哆醇
5
Na2MoO4·2H2O

甘氨酸
20
CuSO4·5H2O
0. 25
称量 溶解 混合 定容
CoCl2·6H2O
0. 25
表1
每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，定容。
贮备液III需加热溶解。混合后调至，定容，保存在棕色玻璃瓶内。
6-BA：1 mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水定容）。
NAA：1 mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸馏水定容）。
各种母液配制完成后，分别用玻璃瓶贮存，贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，放入冰箱冷藏室保存。一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上，有机物质的母液保存时间在半年以内，但若发现有沉淀或霉变,应立即需重新配制。
其他试剂的配置
1 mol/L 的NaOH：1瓶
1 mol/LHCL ：1瓶
%的升汞或2%次氯酸钠：每个超净工作台一瓶（用时处理5-30min)
70~75%酒精：每个超净工作台一瓶
95%酒精：每个超净工作台一瓶
75%酒精棉球：每个超净工作台一瓶
培养基的配制与灭菌
培养基配制
配制培养液（MS培养液）：按每次配制500 mL培养基计，用量筒或者移液管从各种母液中分别取出贮备液I 25 mL、贮备液II、Ⅲ、Ⅳ各5 mL；
溶化琼脂：用粗天平分别称取5g琼脂、15g蔗糖放入500 mL搪瓷缸中，加入蒸馏水400 mL，用用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至500 mL，搅拌均匀。
调pH：用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（～）测培养基的pH，一直到培养基的pH为为止（培养基的pH必须严格控制在）。
培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入组培瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。组培瓶中培养基的量约50 mL 。每500 mL培养基，可分装10～15瓶。
培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。最后在组培瓶外壁贴上标签。
培养基灭菌（高压灭菌）
放培养瓶。将装有培养基的培养瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、 ℃下，灭菌20 min。灭菌后取出培养瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。
其他灭菌
不耐热的物质将采用过滤灭菌