实验八食品中亚硝酸盐的测定.docx

实验十三 食品中亚硝酸盐的测定（盐酸奈乙二胺法）
李亚东
一、实验原理
样品经沉淀蛋白质、 除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重
氮化以后，再与盐酸奈乙二胺偶合形成紫红色染料， 其最大的吸收波长为 538
实验十三 食品中亚硝酸盐的测定（盐酸奈乙二胺法）
李亚东
一、实验原理
样品经沉淀蛋白质、 除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重
氮化以后，再与盐酸奈乙二胺偶合形成紫红色染料， 其最大的吸收波长为 538nm，
因此可以通过测定样品液反应后的吸光度并与标准比较定量。
二、实验试剂
1、氯化铵缓冲液 :在 1L 玻璃烧杯中，加入 500mL 水，准确加入盐酸，混匀，准确加入 50mL 氨水，必要时用稀盐酸和稀氨水调试至。
2、硫酸锌溶液（L）:称取 120g 硫酸锌（ZnSO47H2O）用水溶解并稀释至 1000mL。
3、氢氧化钠溶液 （ 20mol/L）:称取 20g 氢氧化钠用水溶解， 稀释至 1000mL。
4、对氨基苯磺酸溶液 :称取 1g 对氨基苯磺酸，溶于 70mL 水和 30mL 冰乙酸
中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
5、N–1-萘基乙二胺溶液 :称取 N-1-萘基乙二胺，加 60%乙酸溶液，并稀释至 100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
6、显色剂 :临用前将 N-1-萘基乙二胺溶液和氨基苯磺酸溶液等体积混合。
7、亚硝酸钠标准溶液 :准确称取 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，加 100mL 氯化铵缓冲液， 加水稀释至刻度，混匀，在 4℃避光保存。此溶液每毫升相当于 500ug 的亚硝酸钠，作储备液。
8、亚硝酸钠标准使用液 :临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液置于 100mL 容量瓶
中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于亚硝酸钠。
三、实验仪器
分光光度计
四、实验步骤
1、称取 10g 左右的火腿于研钵中，用量筒量取 70mL 的水，加入一部分于
研钵中，将其研成肉糜状。
2、将肉糜状的火腿转移至烧杯中， 用剩下的水冲洗研钵， 一同倒入烧杯中。
加入 12mL 氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌均匀。
3、测量液体的 pH 值，若其大于 8，则将烧杯中所有物质转移至 250mL 容量瓶中；若小于 8，则再加氢氧化钠直至大于 8 为止。
4、加入 10mL 硫酸锌溶液，混匀，容量瓶中出现为乳白色的乳浊液。
5、放入 60℃的水浴锅中加热 10min。
6、取出，用流水冷却，加水定容。然后静置 30min。
7、出去容量瓶中的上层脂肪，然后用漏斗过滤，弃去初始的 20mL 滤液。
但是要全部过滤完得出滤液的总体积。
8、制作标准曲线：吸取 0，，，，，，亚硝酸钠标准使用液（相当于 0，，5，10，
15，20，25ug 亚硝酸盐）分别置于 25mL 容量瓶中分别加入氯化铵缓冲液，加 %
乙酸后，立即加入显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置 25min，用 1cm 比色
杯（