级细胞模型实验报告.docx

Revised as of 23 November 2020
级细胞模型实验报告
广西医科大学
实 验 报 告
科目： 细胞模型实验
年级： 研究生院2016级
组别： A组 据过少不能够完全判定药物的抑制作用，另因为如果孔内的细胞状态不好也有可能导致细胞死亡。
实验三HE染色法观察药物作用细胞后的形态学变化
实验原理：
HE染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别与细胞核和细胞质发生作用，使细胞微细结构通过颜色而改变它的折射率,从而在光镜下能清晰显示出细胞图像,染色的结果是酸性的细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，碱性的细胞质被酸性的伊红染成红色。
实验步骤：
样品制备:胰酶消化贴壁生长细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,每孔2ml加于6孔板,加盖玻片,加入药物培养相应时间,取出盖玻片,用PBS洗涤3次。
:95%乙醇固定20min后PBS清洗2次。
:苏木精染色5-10min后自来水水洗。
:伊红染色1-2min后自来水水洗。
、透明:70%，95%，100%乙醇逐级脱水,二甲苯透明,吹干。
:在载玻片上滴加甘油，将有细胞的一片的盖玻片向下封固于载玻片上。
实验结果及分析:
染色的结果是酸性的细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，碱性的细胞质被酸性的伊红染成红色。如图所示染色的结果随药物浓度变化而变化，药物对细胞的抑制作用较为明显，并且体现出浓度趋势，整体的染色效果尚可。
实验四吖啶橙荧光染色法观察细胞形态学的变化
实验原理：
吖啶橙是一种与DNA和RNA都能结合的荧光染料，在蓝色光或紫外光的激发下，DNA和RNA都会激发出荧光，活细胞经过固定，染色后细胞DNA成亮绿色，核仁和散布在细胞质中的RNA成橘红色，胞质的其余部分为淡红褐色。死亡的细胞，因为物质就够发生变化，其细胞核成暗绿色，细胞质也是成暗绿色。
实验步骤：
胰酶消化贴壁细胞,调整细胞浓度为1×105/ml,每孔2ml加于6孔板,加盖玻片,加入药物培养相应时间,取出盖玻片,用PBS洗涤3次,除去血清
95%乙醇固定15~30min
1%醋酸作用30s，1×10-4AO染色30s~60s，CaCl2处理30s~2min
PBS漂洗3次
甘油封片
实验结果及分析：
对照组 IC50组
正常细胞染色后发出绿色荧光，密度不均匀呈结构样特征，而凋亡小体边缘清晰，呈染色增强，荧光亢进且密度均一，实验组与对照组实验结果对照明显，可见细胞数量在加药组减少。有细胞正在进行分化，还有分化刚刚结束有细胞正在进行分化，还有分化刚刚结束。
实验五TRIzol试剂快速分离细胞和组织中的RNA、ＤＮＡ、蛋白质
实验原理：
TRIzol试剂是目前最常用的细胞和组织中分离ＲＮＡ的试剂，其主要成
分是苯酚，苯酚的作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白和核酸物质释放，由于ＲＮＡ极易被ＲＮａｓｅ分解，所以TRIzol中常加入８－羟基喹啉，异硫氰酸胍等来抑制内源性和外源性ＲＮａｓｅ活性，以保证ＲＮＡ完整。TRIzol试剂还利用RNA、ＤＮＡ、蛋白质在不同溶液中的溶解性质,加入氯仿