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层析分离法
第1页，共136页，2022年，5月20日，19点18分，星期三
层析分离法
22 层析分离法（第一讲）
第一讲
概述
特点：
（1） 纯化倍数高
（2） 操作规模小，放大困难
（3） 终产品纯化
（4） 适子式AI2O3简单，空间形态复杂，8种以上的形态
（3）同一形态宏观结构性质如密度、孔隙率、孔径 分布、比表
面积等存在差异
（4）吸附量与含水量关系很大
制备：由氢氧化铝加热脱水得到的。
吸附基团：铝离子
种类：
碱性：由氢氧化铝高温脱水，用于碱性稳定的溶质
酸性：碱性氧化铝经盐酸洗涤，用于在酸性稳定的溶质
中性：碱性氧化铝经水洗后活化制得
应用：有机溶剂中分离天然成分
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第二讲
层析分离法
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硅胶
层析分离法
第二讲
硅胶是由多聚硅酸经分子间脱水而形成的一种多孔性物质
（1）化学组成 ，
（2）属于无定形结构，基本结构质点为Si一O四面体，相互堆
积形成硅胶的骨架。质点间的空间即为硅胶的孔隙。
（3）硅胶中的水以羟基的形式和硅原子相连而覆盖于硅胶表面。
硅胶的分类（常以孔径大小来分），
(1) 特细孔硅胶 ()。
(2) 细孔硅胶（— )
(3) 中孔硅胶 ()
(4) 粗孔硅胶 ()
应用：吸附层析剂与分配层析剂 优先吸附极性分子及不饱和的碳氢化合物，用于天然产物分离， 可用在水溶液中或有机溶剂中
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琼脂糖
层析分离法
第二讲
由海洋生物琼脂提取得到的主要成分
（1）中性不带电
（2）水溶性线状多糖
（3）高亲水性，含大量羟基
（4）能制成多孔性凝胶，分离大分子
制备：
（1）去除带电琼胶成分
（2）将溶化的琼脂糖采用悬浮,乳化或喷珠的方法制
得珠状介质。
（3）采用交联剂增加介质的机械强度
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琼脂糖的基本结构单位和亲水性凝胶结构
a 琼脂糖结构 b 亲水性凝胶结构
第二讲
层析分离法
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琼脂糖（2）
层析分离法
第二讲
介质商品种类
Sepharose 2B,
Sepharose 4B,
Sepharose 6B。
经过交联而增加机械强度的琼脂糖
Sepharose CL-2B,
Sepharose CL-4B,
Sepharose CL-6B
应用 水溶液中分离蛋白质
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葡聚糖
层析分离法
第二讲
α-1,6 相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到珠粒
性质：
（1）亲水性比琼脂糖高（羟基数多）
（2）化学稳定性及热稳定性好
（3）孔度与机械强度与交联度有关
（4）用于凝胶过滤分子筛
应用：水溶液中分离蛋白质等
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纤维素
层析分离法
第二讲
β-1,4 相连的D-葡萄糖（偶而有1，6 键合）线性天然高聚物
（1）亲水
（2）微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度
大孔珠状纤维素
（1）高孔度
（2）高机械强度
（3 ) 亲水性强
应用：离子交换分离蛋白质介质
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聚丙烯酰胺
层析分离法
第二讲
性质：
（1）丙烯酰胺与交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰
胺共聚
（2）烷烃骨架与酰胺侧链
（3）控制交联剂比例可控制网格孔度
（4）亲水好，但不如多糖介质
(5) 机械强度差
应用：（1）凝胶过滤
（2） 电泳介质
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亲和层析
层析分离法
第二讲
亲和层析(Affinity Chromatography)是利用生物体内存在的特异性相互作用的分子对而设计的层析方法。
生物体内相互作用的分子对：
(1) 酶—底物或抑制剂
(2) 抗原—抗体。
(3) 激素—受体。
(4) 糖蛋白与凝集素,
(5) 生物素—生物素结合蛋白等
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基质活化方法与配基偶联
层析分离法
第二讲
活化(activa