狂犬病口服基因疫苗抗原特性研究.pdf

狂犬病口服基因疫苗的抗原特性研究摘要狂犬病是一个重要的全球性公共卫生问题。我国狂犬病死亡人数高居世界第二位,位居我国重要传染病的榜首。近年来由于养犬数量的增加,狂犬病成为严重危害我国公共卫生安全的问题。本实验构建了一株可以在哺乳动物细胞内表达糖蛋白的杆状病毒,并对其作为新一代口服基因疫苗的抗原制备进行了探索。本实验利用兽用疫苗旮腥綛细胞,以—┰鯡株颍淇寺〉絧载体上,用酶切狦,纯化回收目的基因,亚克隆到经改造后,含有巨瘤病毒启动子的杆状病毒转移载体上,构建了表达质粒>庑鉴定,目的基因与闓基因序列完全相同。使用玴—胂咝曰母俗床《綝在赴诮同源重组,得到重组杆状病毒,经ǎ《綝内含有闓基因,用免疫荧光实验也检测到了的表达。经空斑纯化,得到高效表达的重组杆状病毒,病毒滴度为/。重组杆状病毒感染哺乳动物赴患邢赴”涑鱿郑强梢约觳獾紾谋泶铩K得鞅臼验所得到的杆状病毒,可以进入晡乳动物细胞内但不会出现病毒复制,也不会对哺乳动物细胞造成伤害,但是可以表达糖蛋白,从而为进一步研制狂犬病口服基因疫苗抗原奠定了基础。关键词:糖蛋白重组杆状病毒表达疨
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黼⋯:砷·恤缍恪;的辎硎竽另易论文作者签名:荡广西大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明学位论文使用授权说明本人声明:所呈交的学位论文是在导师指导下完成的,研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有,本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容。除已注明部分外,论文中不包含其他人已经发表过的研究成果,也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体,均已在论文中明确说明并致谢。本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本:学校有权保存学位论文的印刷本和电子版,并提供目录检索与阅览服务;学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文;在不以赢利为目的的前提下,学校可以公布论文的部分或全部内容。口即时发布口解密后发布』
第一部分前言狂犬病研究进展夜袢×餍邢肿狂犬病是由狂犬病毒引起的一种严重侵害大脑中枢神经的重要人畜共患传染病,死亡率几乎ィ窠鲇幸焕袢』颊弑恢斡。该病为自然疫源性疾病,呈地方流行性。感染谱极为广泛,包括狐、狼、鼠、浣熊、猫、蝙蝠、兔、牛、羊、马、犬等动物,以肉食目的犬科和猫科动物最为易感,人对狂犬病中度敏感。在发展中国家,如印度、中国等,带毒犬是入畜狂犬病的主要传染源;在欧洲,野生狐狸是主要病毒宿主,北美主要是浣熊和臭鼬。另外,蝙蝠带毒的情况也很严重,在南美有蝙蝠咬伤甚至非接触性感染导致人和动物患病。近些年来,世界各地蝙蝠和野生动物病例报道逐年增多。据世界卫生组织报道,全世界每年因狂犬病导致的死亡人数为约蛞万人,狂犬病几乎遍及世界各个国家和地区,成为当前严重威胁人民生命健康的一个重要的公共卫生问题。我国在世界上属狂犬病高发地区,是世界上受危害最重的国家之一Ⅲ。世纪年我国狂犬病流行严重,年代曾一度得到控制,但近年来又有新的流行,并出现了一些新的流行特征“7⒉『退劳鋈耸龃斡谟《龋邮澜绲诙弧W昕J纪臣迫丝犬病疫惰,死亡总人数超过例,约每年出现隽餍懈叻澹渤鱿次流行高峰,流行范围几乎遍及全国,但主要在南方流行。近年流行最严重的省份主要是广西、湖南、广东、江西、江苏、贵州、安徽、湖北、山东等省,其发病死亡数占全国的%以上。西北地区发病率较低,除陕西省外,甘肃、宁夏、新疆、西藏等省份有时全年无病例或只有几个病例发生;山西、内蒙古、东北地区的发病率介于南方和西北地区之间。卫生部公布的全国重点传染病疫情监测数据显示,近几年来狂犬病病死数居我国种法定报告传染病首位。每年有千人以上因感染狂犬病而死亡,死亡率ァR虼耍犬病是当前严重危害我国公共卫生安全的重大疫病。年以来,随着养犬热的迸一步升温,狂犬病疫情又逐年快速回升,瓴±厣=兰秃螅煮筝匪妒垦宦畚狂犬病口服基因疫苗的抗原特性研究
袢《痉中袢《净蜃榧捌浔嗦氲鞍犬病疫情增加的势头更猛,到年全国狂犬病死亡人数快速上升,依次为、和例。分别比前一年增加%、%、%和%。年全国共报告狂犬病死亡例,与年同期相比,疫情虽然略有下降,但是依然十分严重,发病地区的数量却并未减少。如年,全国有鱿乇ǜ婵袢。渲杏鱿厥状伪ǜ妗这一流行态势预示着我国又一个狂犬病流行高峰即将形成,如果不及时采取措施,防范动物狂犬病的流行,人的发病和死亡数还将迅速增长。犬狂犬病防制的落后局面是我国狂犬病流行的主要原因。我国目前养犬数量在万一谧笥遥话闩┐蹇袢》⒉÷矢哂诔鞘校饪赡苡肱┐逖慷啵叶辔7叛缺少驯化,预防接种难以实施,群众防疫意识淡薄有关,同时与边远山区疫苗不到位,被犬咬伤后的处理不及时等因素有关。但随着城市家庭“宠物热”的