番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素.doc

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番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素的
提取别离及分析测定
一、实验目的
    1、理解有机溶剂提取番茄红素和β—胡萝卜素的方法及原理
    2、掌握萃取塞，备用。
3、柱层析别离
     向蒸干的粗样品中参加2ml苯使其溶解。用一长颈滴管取样，小心滴入层析柱内，注意产品不能接触柱壁[5]。 翻开活塞，让溶液自然流下，待液面刚好与柱顶氧化铝外表相切时，参加2ml石油醚，用50ml枯燥的锥形瓶[6]接收滴出的溶液。待溶剂液面与氧化铝外表相切时，再参加8ml或更多的石油醚，至滴出的溶液无色，关闭活塞，收集黄色的β-胡萝卜素溶液(a)；翻开活塞，再往层析柱中先后参加2ml及8ml的氯仿，洗至滴出的溶液无色，用另一50ml枯燥的锥形瓶[6] 接收，关闭活塞，收集溶液红色的番茄红素〔b〕。然后用相应温度的水浴蒸干(a)、(b)，差重法分别称出相应浓缩物的重量Wa、Wb()。
  4、苏丹红(Ⅰ)工作曲线
     (Ⅰ)于小烧杯中，参加少量溶剂(建议用氯仿)［B］在通风橱内水浴加热搅拌溶解，待溶液冷却至室温后全部转移到100ml的容量瓶中，用溶剂(建议用氯仿)稀释定容至刻度线，可得到50μg/ml的标准液。然后用10ml的移液管分别移取该溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于五个25ml的容量瓶中，然后参加溶剂将其稀释定容至刻度，它们浓度分别为4μg/ml、8μg/ml、12μg/ml、16μg / ml、20μg/ml。用该
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溶剂作参比溶液，在波长为510nm 下分别测其吸光度，以吸光度对浓度作图，可得到吸光度对浓度的标准工作曲线图及关系式。
  5、番茄红素及β-胡萝卜素含量的测定［D］
     、番茄红素含量的测定及百分含量的计算
  往蒸干〔b〕所得的浓缩物中参加5ml的氯仿溶解，此溶液的浓度为C1；，用定量的氯仿分步稀释该溶液，(Ⅰ)溶液的颜色接近，此时溶液的浓度为C2［7］。在400-600nm区间测定番茄红素最大吸收波长λma*，在此λma*下测其吸光度［C］。将该吸光度值代入标准工作曲线，求出其浓度C2，从而推算出番茄酱中番茄红素的含量。
  其中：f是C1稀释到C2倍数；各值的单位：C2：μg/ml;W 番茄酱：g.
 、β-胡萝卜素含量的测定及色价的计算［D］
 用5ml石油醚作溶剂溶解(a)的浓缩物，取出１ml，再用石油醚稀释3-5倍，-。然后以石油醚作参比溶液,在480nm测其吸光度。由色价公式算出稀释后的浓缩物中β-胡萝卜素的色价，从而推算出样品番茄酱中β-胡萝卜素的色价。色价计算公式：
  E：稀释后浓缩物的色价、A：吸光度、V：稀释浓缩物所用石油醚的总体积(ml)、m：浓缩物〔b〕的质量Wb(g)
      番茄酱中β-胡萝卜素的色价计算公式：
     m稀释后浓缩物E稀释后浓缩物 = m番茄酱E番茄酱
实验探究局部(下划线局部