高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
第1页，共26页，2022年，5月20日，20点34分，星期四
实验项目
一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
二 氨茶碱加样回收率实验
三 氨茶碱溶液稳定性实验
四 紫外分ion Chromatography)
● 键合相色谱（Bonded phase chromatography）
● 离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.）
● 空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.）
● 亲合色谱（Affinity Chromatography）
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在以上五种分离方式中，反相键合相色谱应用最广，因为它采用醇—水或腈—水体系作流动相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37—）键合到硅胶表面。这种键合相又称ODS（Octadecylsilyl）键合相，如国外的partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODS，国产的YWG-C18等。
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实验目的
熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；
了解反相色谱法的原理、优点和应用。
了解流动相的选择依据及配制方法；
掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基
本方法。
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实验原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
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实验器材与材料
实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、50ml容量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。
实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈、三氟乙酸、超纯水。
HCl溶液配制：准确量取HCl溶液 ,用蒸馏水定容至1000ml，即得。
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实验步骤
色谱操作条件;
标准溶液配制；
标准曲线的建立；
样品溶液的配制；
甲硝唑样品含量测定。
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色谱柱：C18柱（150×,5μm）；
流动相：乙腈：%三氟乙酸水溶液（20：80）
流速：1mL/min
检测波长：277nm
柱温：35℃
进样量：20μL
：
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2. 标准溶液配制
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中， HCl溶液溶解并定容至刻度，，备用。
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3、标准曲线的建立
、、、、， HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，，，各进样20μL检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。
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线性要求：
，浓度点n＝5。用浓度c对峰面积A作线性回归处理，得一直线方程，，方程的截距应近于零。
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4. 样品溶液的配制
精密称取甲硝唑原料药10mg，置于50ml容量瓶中， HCl溶液溶解并定容至刻度，摇匀，，即得甲硝唑样品溶液。
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用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液适量，