大学土壤微生物分离实验报告.doc

大学土壤微生物分离实验报告
从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告
生物科学与技术系
09食品（2）班
姓名：xxx
~。
1、称量和溶解 先计算后称量,按用量先称取可溶性淀粉,放入小烧杯中,并用少量冷水将其调成糊状,再加至少于所需水量的沸水中,继续加热,边加热边搅拌,,方法是先在100 ml ,,再在200 ml的培养基中加入以上储备液
,,其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制.
2、pH 调节`分装 包扎 灭菌及无菌检查同上（一）
（三）配制马丁氏培养基200ml(用1个100ml三角瓶和2支试管分装）
马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。配方如下： K2HPO4 ， , 蛋白胨1g, 葡萄糖2g, 琼脂3~4g, 水200mL，自然pH
1、称量和溶解 先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需水量的水中。待各成分溶解后，补充水分至所需体积。再将孟加拉红配成1%的水溶液，在200 ，混匀后，再加入琼脂加入融化，方法同（一）
2、同（二）2
3、链霉素的加入 链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化待其温度降至45摄氏度左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液（配好的链霉素溶液保存于-20摄氏度），在100ml培养基中加入1%,使每毫升培养基中含链霉素30ug。
制备土壤稀释液：
1、取土壤
取表层以下5~10cm处的土壤样品，放入灭菌的袋中备用，或放在4oC冰箱暂存。
2、制备稀释液（要无菌操作）
（1）制备土壤悬液：，迅速倒入带玻璃珠的无菌水瓶中（玻璃珠用量以充满瓶底为最好），振荡5~10min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬液。
（2）稀释：用无菌移液管吸10-, 无菌水中,即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3~10-7的稀释液。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换一支移液管，每次吸土液，要将移液管插在液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。
示意图如下：


10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
稀释过程示意图
（图中左侧梯形为三角瓶，，土壤溶液稀释度为10-2
依此类推，右侧三试管中土壤稀释度分别为： 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 ）
混菌测定菌落数的方法
1）细菌 取10-6， 10-7 两管稀释液各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。然后取冷却至50℃的牛肉膏琼脂培养基，分别倒入以上培养皿中（装量以铺满皿底的2/3为宜），迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混均，但不沾湿皿的边缘，待琼脂凝固即成细菌平板，倒平板时注意无菌操作。
2）放线菌 取10-3、10-4两管稀释液，在每管中加入10%酚液5~6滴，摇匀，静置片刻，然后分别从两管吸出1ml加入相应标号的平皿中，选用高氏1号培养基，用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成放线菌平板。
3）霉菌 取10-2、10-3两管稀释液各1ml，分别接入相应的平皿中，每个稀释度接两个平皿。在熔好的马丁氏固体培养基中，每100ml加入灭菌的乳酸1ml，轻轻摇匀，然后用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成霉菌平板。
4）酵母菌 在3）即可能分离到。

将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于28~30oC恒温培养，细菌培养1~2d，放线菌培养5~7d，霉菌3~5d。可用于观察菌落，用于进一步纯