DNARNA同步纯化试剂盒说明书.doc

DNA/RNA同步纯化试剂盒说明书
产品组成
DNA/RNA同步纯化试剂盒
Cat. No.
5次样品
5001005
50次制备
5002050
DNA纯化柱
RNA纯化柱
2 ml离心管
β-巯基乙醇
Buffer RLT
Buffer WA
Buffer WBR
RNase-Free Water
说明书
5套
5套
5个
50 µl
4 ml
3 ml
2 ml
ml
1份
50套
50套
5个
500 µl
32 ml
24 ml
19 ml
2 ml×3
1份
产品储存与有效期
试剂盒如果储存于室温(15~25℃),可在两年内保持使用性能无明显变化;如果将产品储存于2~8℃,可延长产品的有效期至两年以上。
技术支持
杭州新景生物试剂开发有限公司研发部:e-mail: technical@, 电话:400-0099-857。
产品介绍
本产品不涉及酚氯仿的使用,适合从≤25mg组织中分离纯化总RNA。组织经裂解液溶解后分别滤过DNA纯化柱和RNA纯化柱,溶解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去。最后结合在纯化柱上的DNA或RNA分别被RNase-Free Water洗脱,即可用于PCR,RT-PCR,Northern blot,Dot blot,mRNA分离等各种分子生物学实验。
用户需自备的试剂与物品
无水乙醇和70%乙醇。
RNase-free
移液器及吸头(为避免RNA酶的污染,建议选用含有滤芯的RNase-free移液器吸头)
一次性手套及防护用品和纸巾
台式小量离心机()
旋涡震荡器
无RNA酶使用的实验室
使用前准备
如果离心机有制冷功能,请将温度设置到25℃。
每1 ml Buffer RLT中加入10 µl β-巯基乙醇,混合均匀。加入β-巯基乙醇的Buffer RLT一个月内使用不影响实验结果。
根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入无水乙醇,并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。
因唾液、皮肤上均含有RNA酶,请在RNA的提取的全过程中都戴乳胶手套和口罩。
组织中DNA/RNA同步纯化操作步骤:
1. 在研钵中加入约200~400 mg切成碎屑的动物组织和液氮,将组织研磨至粉末状, ml离心管称取20~25 mg研磨成粉末状的组织。
* 研磨组织时应及时补加液氮,避免组织融化,以免内源性的RNA酶恢复活性而降解RNA。
* 勿使用超过25 mg组织,否则可能导致DNA纯化柱堵塞,并使纯化的RNA中混有基因组DNA污染。
2. 加入600 µl已经加入了β-巯基乙醇的Buffer RLT,旋涡振荡直至组织全部溶解,溶液呈半透明状。
* Buffer RLT具腐蚀性,请戴防护用品进行操作。
DNA纯化:
3. 13000 rpm 离心2分钟,将组织的溶解物中的上清液全部转移到DNA纯化柱中,盖上管盖,13000 rpm 离心1分钟。保留滤液进入步骤4操作,将DNA纯化柱放入一个洁净的2ml离心管中,由此进入步骤6的DNA/RNA同步纯化操作。
* 勿吸取管底沉淀,以