实验四微生物的染色 (2).ppt

第十章 微生物的实验
实验一 显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察
(一)目的
(1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养.
(2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,，斜置于木棒上，使其斜面长度为试管的1/3~1/2，代培养基凝固后即成斜面
B 营养琼脂培养基的制备
1）培养基配方：，，，琼脂3g，蒸馏水150ml， 。.
2）操作： a取300ml烧杯一个，装150ml蒸馏水。
b 在药物天平上一次称取配方中各成分，水中溶解，带待琼脂完全溶解后停止加热，补充水分，用10%NaOH调pH =，省略过滤，培养基分装五支试管中，余入250ml锥形瓶，塞上棉塞，包炸好待灭菌
3无菌水制备
1）取250ml锥形瓶装90ml蒸馏水，赛棉塞，包扎，待灭菌
2）取5支18mm*18mm试管，分装9ml蒸馏水………
4灭菌 杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢或孢子
灭菌方法 过滤除菌，化学药品消毒，利用酚、甲醛等是细菌蛋白质变性灭菌；高温，紫外线等物理方法加热灭菌是主要的：干热灭菌，高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）。后者在121oC灭菌15~30min,效果好。
1）干热灭菌法：用于培养皿等玻璃仪器。包装好的上述物品放入恒温箱中，160oC维持2h，旋钮调至零，到50oC可取
2）高压蒸汽灭菌：微生物试验所需仪器培养基，皆可用高压灭菌锅灭菌
2）灭菌操作过程
A 先加水，放物品，盖锅盖，对称的拧紧螺栓，防 漏气。
B 加热，并开排气阀，冒热气3~5min后关。到所需压力 计时，达灭菌时间后停止加热
C 压力为零开排气阀，取物
D 将灭菌后的培养基于37oC恒温箱24h，作无菌培养，若无菌生长，可保存备用。
实验六 微生物的纯种分离、培养和接种技术
一 目的要求
掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本要求
二 仪器材料
三 操作方法及步骤
1 微生物的纯种分离及培养：稀释平板法和平板划线法
1）稀释平板法
a 取样 用无菌锥形瓶取定量的会活性污泥
b 稀释水样 将一瓶90毫升和5管9毫升的无菌水按10-1
至10-6依次编号。无菌条件下用10ml移液管取10ml水样于第一瓶90ml无菌水中，摇匀即得10-1浓度的菌液。移液管吹洗3次
用1ml无菌移液管取1ml 10-1浓度的菌液于9ml无菌水中摇匀。同法，依次稀释至10-6
C 平板制作
将10套无菌培养皿编号10-4 10–5 10-（吸前移液管吹使其混匀）。同时加热琼脂培养基，熔化，冷至45oC时，注10~15ml入培养皿。立即盖盖，混匀，冷却后即成平板。将培养基倒置于30恒温箱中培养，48h后观察结果
（2）平板划线分离法
a制作: 将熔化冰冷至50oC的营养琼脂培养基 10~15ml
导入无菌培养皿，凝固成平板
b划线：以无菌操作，接种环挑污泥于在平板上划线，盖盖，倒置于30oC恒温箱培养48h后观察结果
2其他接种方法的操作
1）斜面接种技术
A 贴标签 B 点燃酒精灯 C 将一支斜面菌种和一支待接种的斜面培养基放左手，拇指压住两试管，中指于其间，斜面向上，管口齐平。
D接种环灭菌
E 将棉花拔出，试管口微绕火焰。用接种环迅速移菌种于另一试管底部，再接种环上有底部向上画曲线。接种环灭菌。
2）液体接种 由斜面基接种到液体培养基。用接种环将菌种全送入液体培养基，塞棉花，转动使其混匀。
3）液体培养基中的菌种被接入液体培养基
用无菌移液管自菌种管吸取菌液接种到另一液体培养基中赛好棉塞即可
4）穿刺接种将斜面培养基接种到固体或半固体深层培养基
自中心刺入，直到管底，但不穿透，并沿穿刺途径拔出，易于观察。
实验七纯培养菌中的菌体、菌落形态观察
一目的
观察菌形态及菌落特征，通过革氏染色了解活性污泥有
哪些微生物组成。
二仪器材料
三试验内容与方法
1菌落形态和菌体染色及其形态观察
A接种斜面培养基
B菌落形态特征观察 酵母菌菌落圆形，大小接近细菌，光滑，质地软，多为白色和红色。放线菌洛硬度大