凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.docx

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（通用）
（BIOTIN标记POD法，适用于细胞、组织样本）
使用说明书
―、TUNEL制品说明
凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素at：
KGA703
50 assays
Cat：
KGA704
100 assays
储存条 件
Equilibration Buffer
mL
mL
mL
-20°C
Biotin-ll-dUTP
20口L
50口L
100口L
-20°C
TdT Enzyme
80口L
200 口 L
400 口L
-20C
50XPr ot einase K
40口L
100口L
200 口 L
-20C
St reptavidin-HRP
10uL
25口L
50口L
4C避 光
DAB
2mg
5mg
10 mg
-20C
试剂盒以外自备仪器和试剂
光学显微镜、37°C孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。
二甲苯、多聚甲醛、PBS、HO、Tri to nX-100、柠檬酸钠、复染染液：木素或甲
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基绿等。
三、操作流程概览
四、检测样本的预处理
TUNEL 检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普 遍情况，用户需根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件（参照 Page 9），如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出 客观的试验结果。
1． 细胞样本的准备
操作注意事项：
为防止样本脱落，请使用硅烷（Sil ane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。
使用 PBS 清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。
进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。
固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。
五、 标记和显色反应
操作注意事项：
1. 进行 PBS 清洗时，以 5 分钟清洗 3 次为标准。
PBS 清洗后，为了各种反应的有效进行，请尽量除去 PBS 溶液后再进行下一步 反应
在载玻片上的样本上加上实验用反应液后，请盖上盖玻片或保鲜膜，或在湿 盒中进行，这样可以使反应液均匀分布于样本整体，又可以防止反应液干燥造成 实验失败。
TdT 酶反应液即用即配，短暂于冰上保存。不宜长期保存，长期保存会导酶 活性的失活。
如果20XDAB溶液颜色变深成为紫色，则不可使用，需重新配制。
现象
可能原因
建议
木素复染：将切片放入木素染液，染色30s-10min （根据样本做适当调整）， 蒸馏水冲洗干净后放入盐酸甲醇溶液中5s，立即用蒸馏水冲洗干净。分别用70%、 85%、95%、无水乙醇浸泡5分钟。用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡- 1 0分钟。晾干后在切片上加中性树胶，加盖玻片。
六 常见问题的原因及推荐解决方案
非特异性染色 （例如：非凋 亡细胞的强染 色）
Biotin-dUTP 的非 特异性结合
勿使细胞干涸
在TdT酶反应之后，% Tri ton X-100 和 1 mg/ml BSA 的 PBS 洗三次。