高效液相色谱法(13).ppt

第八章
高效液相色谱法
(HPLC)
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第一节 液相色谱仪器（high performance liquid chromatograph）
液相色谱仪（1）
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液相色谱仪（2）
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数差
值。差值与浓度呈正比；
通用型检测器（每种物质
具有不同的折光指数）；灵敏
度低、对温度敏感、不能用于
梯度洗脱；偏转式、反射式和
干涉型三种。
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示差折光检测器
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d. 荧光检测器（fluorescence detector）
高灵敏度、高选择性；
对多环芳烃，维生素B、
黄曲霉素、卟啉类化合
物、农药、药物、氨基
酸、甾类化合物等有响
应。
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§17-2 基本理论
一 色谱柱柱效的基本关系式
二 分离度
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三 速率方程
溶质在液相流动相中的扩散系数，约为气相中扩散系数的万分之一
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流动相流速对板高的影响
1)小颗粒填料，填充均匀；
2) 选择较低的流动相流速；
3) 选择粘度小的溶剂作流动相，改善传质。
修正的速率方程：
提高柱效途径
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硅胶－强极性
氧化铝－弱极性
活性炭－非极性
分子筛－强极性
高分子多孔微球(GDX)
固体吸附剂
§17-3 高效液相色谱分离方法
一(液-固)吸附色谱法
1.
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吸附剂一般为多孔性的物质，在它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的活性中心上进行竞争，同时不同溶质之间和同一溶质的不同官能团之间也存在竞争。竞争的综合结果就是形成不同溶质在吸附剂表面吸附、解吸平衡。
2 分离原理
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Kad值越大，保留时间越长。
可表式为：
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吸附色谱的分离机理
随着样品在固定相上的吸附能力由大到小
在色谱柱上的保留由长到短
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硅胶表面结构
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硅胶表面结构经热处理发生的变化
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缺 点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。
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极性吸附剂上有机化合物的保留顺序如下：
氟碳化合物<饱和烃 <烯烃<芳烃<有机卤化物<醚<硝基化合物<腈<叔胺<酯醛酮<醇<伯胺<酰胺<羧酸<磺酸
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3 流动相(洗脱剂)
越大，表明流动相溶剂分子对吸附剂的亲和能力越强，则越易从吸附剂上将被吸附的溶质洗脱下来。
溶剂分子在单位吸附剂表面上的吸附自由能
溶剂强度参数
各种不同极性的一元或多元溶剂。
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硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯
流动相：
干燥正庚烷
1份水饱和的正庚烷
2份干燥正庚烷
水饱和的正庚烷
改变流动相的
组成可改变分离
的选择性
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4 应用
具有不同官能团的化合物
具有相同官能团，但数量不同的化合物
异构体
例：几种取代位置不同的硝基苯胺的分离。在硅胶吸附剂上的滞留顺序：
邻位<间位<对位
邻硝基苯胺
间硝基苯胺
对硝基苯胺
适合分离的物质
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吸附色谱概述
分离基于样品的极性差异。
洗脱次序∶一般为正相，即：极性低的先被洗脱
常用的流动相∶
非极性有机溶剂，如己烷
常用固定相∶
硅胶、氧化铝。
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二 分配色谱法

K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关
固定相与流动相均为液体（互不相溶）；
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分配色谱的分离机理
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固定相极性>流动相极性
正相分配色谱
组分极性越大，保留时间越长
反相分配色谱
固定相极性<流动相极性
组分极性越小，保留时间越长
动 相：
对于亲水性固定液，：
当流 动相的极性大于固定液的极性时：
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固 定 相：
早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；
化学键合固定相：
（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶
（担体）表面的游离羟基上。
如 C-18柱（反相柱）。（详见后面）
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分配色谱概述
反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离
洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱
常用的流动相：
有机溶剂如甲醇、乙腈，水
应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法
常用固定相：
碳十八、碳八、胺基等基团
反相色谱固定相多为键合相
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1 固定相
阳离子：
－SO3H(强)
－CO2H(弱)
阴离子：
－N+R3(强)
－NH2 (弱)
基质
合成树脂
纤维素
硅胶
离子交换剂
阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
三 离子交换色谱法
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2 流动相
水相缓冲液+有机改性剂
调节选择性的主要参数
盐种类