高效液相色谱法(3).ppt

高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography （HPLC）
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前言:
HPLC是70年代以后发展最快的一个分析化学分支，现已成为生化、医学、药物、化学化工、食品卫生高效
气相色谱的分离效能很高，高效液相色谱的柱效则更高（化学键合相），一般约可达 6000理论塔板／米
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高灵敏度
①紫外检测器的最小检测量可达(10-9 g)；
荧光检测器的灵敏度可达10-11g。
②所需试样很少；微升数量级
高选择性
可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物
(同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物）
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五、HPLC与GC区别
1．分析对象的区别
GC：适于能气化、热稳定性好、沸点低的样　
品， 占有机物的20%
HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品.
　　　 对分子量大、难气化、热稳定性差　　
样品均可检测 。
占有机物的80%
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2．流动相的区别
GC：流动相为惰性，组分与流动相无亲合作用
力，只与固定相有相互作用。
HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用
力，能提高柱的选择性、改善分离度.
对分离起主要作用。
3．操作条件差别
GC：加温操作 GC：破坏样品，不能回收
HPLC：室温；高压 HPLC：不破坏样品，能回收
说明：气相、液相地位同样重要
两种互补不足的色谱方法
灵敏度：气相﹥液相 应用范围：液相﹥气相
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六、色谱法的分类
吸附色谱(Absorption Chromatography)
组分对固定相表面吸附力的不同而分离
分配色谱(Partition Chromatography)
组分在固定相和流动相中的溶解度不同而分离
离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography)
组份离子交换亲和力的差异而分离
体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography)
组分分子量大小不同,对固定相的渗透力不同而分离
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§１－２　基本概念
一、色谱图（chromatogram）
检测器将流动相中各组分浓度变化转变为相应的电信号。
记录仪所记录下的浓度对分离时间的函数，称为色谱图。
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色谱过程特点：
①浓度对分离时间呈高斯曲线型
②色谱条件一定时，各组分都有一特定时间在图谱中出现，称为组分的保留时间。
③柱效一定时，组分保留值越小，峰越
窄；保留值越大，峰越宽。
④相邻峰的保留时间相差越大，越易分离。
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常用术语：
1. 基线 : 仅有纯流动相进入检测器时的流 出曲
线。
: 响应信号大小随时间变化所形成的峰
形曲线。(正态分布)
：
峰高：色谱峰顶点与峰底之间的垂直距离
用h表示。
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峰面积：
峰与峰底之间的面积 ，用A表示。
二、色谱保留
1. 保留时间（tR）
从进样开始到柱后出现样品的浓度极大值所需的时间，用tR表示。
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组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度比（单位：g/mL），称为分配系数，用K 表示:
分配系数是色谱分离的依据。
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分配系数K 的讨论
一定温度下，组分分配系数K越大，出峰越慢；
每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；
选择适宜的固定相可改善分离效果；
各组分有不同K 值是分离的基础（差移速度）
某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流
出。
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’ (capacity factor)
一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比。
’都是与组分及固定相的热力学性质有关
的常数, 随分离柱温度、柱压的改变而变化
’都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数
，数值越大，该组分的保留时间越长。
3. 容量因子可以由实验测得。
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4. 容量因子与保留时间的关系
推导: ux：组分在分离柱内的迁移速度；