高效液相色谱法(10).ppt

第十三章 高效液相色谱法
，混合溶剂强度参数的计算（了解）
；紫外检测器和荧光检测器的检测原理和适用范围。（熟悉）
，分离条件，与液相色谱气相色谱的区别。
（二）紫外检测器
检测原理：
朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比
A=εCl
特点：
灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。
局限：
只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。
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紫外检测器
固定波长检测器 ：254nm
可变波长检测器：
光源：氘灯（和钨灯）， 200—400（800）nm，
单色器，流通池（试样），光电管
光路系统和紫外分光光度计相似
光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector；PDAD)：
一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光
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紫外检测器
光电二极管阵列检测器
工作原理：复光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱－色谱图。
用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判断峰纯度。
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（三）荧光检测器(FD)
检测原理：
化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光 荧光强度 (F) 与激发光强度 (I0) 及荧光物质浓度 (C)
之间的关系为：
F=
Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系数，l为光径长度。
F=KC
特点：选择性好，专属型检测器
灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml）
激发波长(ex)和发射波长(em)的选择
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一、主要类型
1. 固定相的聚集状态
液液色谱法（LLC）和液固色谱法（LSC）
2. 分离机制：
分配色谱法 吸附色谱法
离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）

亲合色谱法（AC） 手性色谱法（CC）
胶束色谱法（MC） 电色谱法（EC）
化学键合相色谱法
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第二节　高效液相色谱法的固定相和流动相
固定相应符合下列要求：
颗粒细且均匀；
传质快；
机械强度高，能耐高压；
化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。
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一、液-固吸附色谱固定相

表孔硅胶（薄壳玻珠）（YBK）
无定形全多孔硅胶(YWG)
球形全多孔硅胶(YQG)
堆积硅胶(YQG)

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二、液-液分配色谱固定相
化学键合相色谱法的固定相
以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法（BPC）
化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所 形成的固定相
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（二）键合相的性质和特点

硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应
硅氧碳键型： ≡Si—O—C
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化学键合相形成具备的条件


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（1）非极性键合相 ：
非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等键合在硅胶表面；
用于反相色谱；ODS
（2）极性键合相：
常用-NH2、-CN键合相
（氰乙硅烷基≡Si(CH2)2CN)键合硅胶
一般用于正相色谱
（3）离子交换键合相：
常用-SO3H、 -COOH、 、-R3NCl
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使用过程中不流失；
化学稳定性好；
柱效高，分离选择性好；
适于梯度洗脱；
载样量大
注意： 流动相的pH一般应在3-8，否则会引起硅胶溶解；
(也有适用宽pH范围的键合相)
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二、化学键合相色