微生物大实验 土壤中微生物的分离鉴定.docx

土壤中微生物的分离与研究
一、实验目的
学习微生物纯系分离、培养方法。
掌握划线分离纯化微生物的方法。
掌握微生物生理生化反应的研究方法。
了解该菌种的生物学特征。
二、实验原理土壤是微生物的良好生境,土壤中有多种类群的微生物,土壤中微生物的分离与研究
一、实验目的
学习微生物纯系分离、培养方法。
掌握划线分离纯化微生物的方法。
掌握微生物生理生化反应的研究方法。
了解该菌种的生物学特征。
二、实验原理土壤是微生物的良好生境,土壤中有多种类群的微生物,它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用,对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。根际微生物与植物的关系特别密切,不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响,而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同,也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。
土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说,在土壤表面,由于日光照射及干燥等因素的影响,微生物不易生存,离地表10cm〜30cm的土层中菌数最多,随土层加深,菌数减少。
土壤中微生物以细菌数量最多,为几百万个/克土至几亿个/克土,有各种生理类群,营养类型多属异养型,鉴别染色多为革兰氏阳性。放线菌含量为几万个/克土至几百万个/克土,但其生物量不比细菌低,因为菌丝体积较大。土壤中真菌含量为几千个/克土至几十万个/克土,而其生物量常比细菌的大。
通过土壤微生物的分离与计数及划线纯化,涂布分离长出的单菌落,须经划线纯化,再转斜面培养后保藏备用。涂布分离细菌的平板,温箱培养Id〜2d后,然后挑取各单菌落的部分培养物,在预先制备好的平板上划线纯化。根据所得纯种菌,依次进行简单染色,革兰氏染色,芽孢染色,确定菌种的形态特征。然后根据伯杰手册确定菌种的大体范围,有针对性的进行生理生化实验,从而最终确定菌种所在的属。
三、实验材料
1•培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基、固体油脂培养基、固体淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基。
染液和试剂:5%孔雀绿水溶液、%番红水溶液、1%结晶紫水溶液、20%硫酸铜水溶液、95%乙醇、卢戈氏碘液、甲基红指示剂、乙醚、吲哚试剂等等。
仪器和其他用品:无菌平板、接种环、试管、刮刀、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、接种环、镊子、载玻片夹、试管架、滤纸、锥形瓶、电炉。
四、实验步骤

(1)取样
从生物北楼北侧小田地里选择土壤较肥沃的地方取得土壤,称量10g放入锥形瓶中,加入90ml水,静置30min。
(2)稀释
将土壤样品10g加入90ml灭菌水中振荡30min,形成土壤悬浊液,取1ml加入装有9ml灭菌水试管中振荡形成10-1稀释,依次将土壤样品稀释10-210-3、10-4、10-5。
(3)涂布
将0、10-110-210-3、10-4、10-5的稀释样品分别涂布到已制好的固体培养基平板上,每种涂3个平板。
(4)培养
将平板置于37°C恒温培养三天。
分离
从平板中挑取单个菌落按照下图进行平板划线分离培养,培养1天,共选了6种菌,1个霉菌。
纯化
将划线长出的菌接种于已准备好的固体斜面培养基中,培养1天。
镜检
对平板中的6