豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离.ppt

实验十八
豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离
2017/11/10
豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离
目的要求
实验材料
实验程序
思考题
目的要求
观察几种豆科植物的根瘤和根瘤细菌的形态。
掌握从根瘤中分离根瘤细菌的方法及培养的方法
实验材料
不同豆科植物新鲜标本数株,不同豆科植物的浸制标本。
加入结晶紫的根瘤菌培养基(10mL)。
无菌培养皿、接种环、1mL无菌水、2mL无菌水、手术剪、无菌玻棒、载玻片、镊子、酒精灯、显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。
%升汞液。革兰氏染色液一套。
实验程序
观察豆科植物根瘤和根瘤细菌的形态。
分离豆科植物根瘤菌
实验程序Ⅰ(观察豆科植物根瘤和根瘤细菌)
观察几种豆科植物根部根瘤的形状、色泽、以及着生部位,识别有效根瘤和无效根瘤,或观察几种豆科植物浸制标本的根瘤形状,并绘图。
观察根瘤细菌的形态:用镊子取根瘤1个,洗净后放在洁净的载玻片上,加蒸馏水1滴,然后再用另一洁净载玻片在这根瘤上轻轻压出根瘤中的汁液,再取此汁液用接种环涂片,(亦可用分离到的根瘤菌悬液涂片),用简单染色法染色,油镜下观察并绘图。
实验程序Ⅱ( 分离豆科植物根瘤菌)
选择1株生长健壮的豆科植物,在主根部位选择1个红润饱满的较大根瘤,连同1小段根剪下,以免损伤根瘤,用清水洗净。
将根瘤浸泡在75%酒精的无菌培养皿中,5min后,用镊子将根瘤转入盛有%升汞(HgCl2)溶液的无菌培养皿中浸泡2—3min,以杀死根瘤表皮附着的杂菌,消毒时间一到,马上用无菌镊子将根瘤转入盛有无菌水的培养皿中,用镊子翻动几次,然后用镊子挟起根瘤,再用无菌水冲洗几次,洗去残存的升汞液。
将已消毒的根瘤放入装有1mL无菌水的试管中,用无菌玻棒轻轻挤压根瘤,制成根瘤菌悬浊液备用。
实验程