口服食物抗原诱导的类风湿性关节炎动物模型的建立及评价.pdf

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学位论文作者:烈舟学位论文作者:送艄原创性声明日期:/暾荚拢学位论文使用授权声明日期:砂//年拢袢本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
液相色谱仪检测并计算乳果糖、甘露醇比值,并将组、摘要琁认且恢忠月浴⒔行浴⑶窒中的作用进行初步探索,为临床的预防和治疗提供理论依据。类风湿关节炎关节炎为主要表现的全身性自身免疫疾病。如果不经过正规治疗,患者病情会逐渐发展,最终导致关节畸形、功能丧失。具有很高的致残率,严重影响患者的健康和生活质量,同时也给患者家庭和社会造成巨大的经济负担。众多研究已表明食物与的发生密切相关。目前通过皮下注射型胶原蛋白诱导的模型是最佳的实验动物模型。尽管通过注射的方式能成功有效地诱导大鼠产生类风湿关节炎,但皮下注射的诱导方式并不符合人体摄食模式,其忽略了胃肠道在发病中的重要性,使发病机制的研究出现了一个极为重要的空白点:即食物抗原在人体摄食过程中如何通过肠上皮粘膜屏障进入肠道粘膜固有层,引起肠道相关免疫组织细胞的一系列免疫应答,扰乱肠粘膜免疫组织的固有与适应性免疫反应,并通过分子拟态和旁观者效应打破免疫耐受,进而导致发生的机理。为了深入发病机制的研究,建立一种与人发病机制及病理相同或相似的动物模型诜澄锟乖盏嫉腞锬P在研究中的作用也就显得尤为重要。目的:建立口服牛型胶原蛋白诱导的大鼠模型;确定口服食物抗原与的相关性;并在动物模型的基础上,对肠道通透性在食物抗原诱导的发病机理方法:本研究选择大鼠作为实验动物。从牛软骨中提取牛型胶原蛋白,先用阿司匹林破坏大鼠的肠道粘膜屏障功能,然后灌胃给予大鼠较大剂量的牛型胶原蛋白,诱导大鼠类风湿关节炎的发生。将芰浯菩訵笫笏机分成四组:对照组硌嗡簧硌嗡、组硌嗡簧硌嗡、组/阿司匹林;牛型胶原蛋白、组痥⑺酒チ郑慌徒涸鞍T诎⑺酒チ止辔钙诩洌七天灌胃给予大鼠一定量的乳果糖和甘露醇,用代谢笼收集大鼠颍咝
,氏,说明组、指数评定。建模结束后,取大鼠血清、空肠组织和踝关节组织。采用双组与对照组相比,间接评价大鼠肠道通透性的变化情况。建模过程中,用游标卡尺测量并记录大鼠右后腿踝关节的直径,两周一次,一共危⒔泄亟抗体夹心ú舛ǜ髯榇笫笱G逯信徒涸鞍滋匾煨钥固逅健⑾赴因子產、∈笛槎锏目粘王坠亟谧橹霉潭ㄒ固定后,石蜡包埋切片,,光学显微镜下观察其病理形态结构的变化以及淋巴细胞浸润渗透的情况;用荧光免疫组织化学的方法,以小鼠来源的牛型胶原蛋白单克隆抗体作为一抗,以标记的山羊抗小鼠的魑6梗ㄎ豢粘χ械呐徒涸鞍祝鄄炱涫欠衲芄煌üφ衬さ钠障从而进入肠道粘膜固有层;用荧光免疫组织化学的方法,以小鼠来源的牛型胶原蛋白单克隆抗体作为一抗,以标记的山羊抗小鼠的魑6梗定位关节滑膜上的牛型胶原蛋白,观察其在关节滑膜上的沉积情况。通过以上指标对所建立的类风湿关节炎大鼠模型进行综合评价。结果:在建模结束后,组、组大鼠踝关节呈现不同程度的肿胀;组、组大鼠血清中抗牛型胶原蛋白特异性抗体显著升高,血清中產和畆水平明显升高.⑶、组大鼠空肠病理学改变明显:肠粘膜损伤严重,粘膜下层中性粒细胞浸润明显,肠绒毛水肿肥大,肠粘膜上皮细胞广泛脱落等;荧光免疫组化显示未经消化的大分子牛型胶原蛋白透过损伤的肠上皮粘膜屏障进入肠道粘膜固有层;在组、组大鼠踝关节标本组织学中观察到滑膜组织增生,其局部骨吸收破坏明显,软骨表层胶原纤维松解断裂、软骨细胞变性坏死,软骨表面凸凹不平等;并通过荧光免疫组化的方法观察到组、组大鼠关节滑膜上牛型胶原蛋白的沉积。双糖实验,组、组大鼠尿中的甘露醇浓度降低组大鼠的肠道通透性增加。结论:在肠黏膜损伤的条件下,口服牛型胶原蛋白可成功诱导大鼠产生类风湿关节炎。关键词:类风湿关节炎食物抗原肠道通透性大鼠模型摘要
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