吞噬细胞吞噬功能检测实验.docx

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Everlab云端实验室—----吞噬细胞吞噬功能检测实验
实验概要
本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测(Assayofthe PhagocyticFunctionofPhagocyte)实验的基本原理、操作步骤及注意事项等.
实验原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,,可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂
. 3%硫代乙醇酸钠ﻫ3。 1%羊红细胞悬液
4。瑞氏染液

主要设备

2。 注射器




实验材料
ICR 小鼠
实验步骤
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1. 实验准备:用无菌注射器吸取3%硫代乙醇酸钠3ml,注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后,注射1%羊红细胞悬液1ml于小鼠腹腔内。,将小鼠用颈椎脱臼法处死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用镊子轻轻夹起腹膜,将腹膜剪一小口,用尖吸管注入5ml 预温的PBS,同时用手反复揉搓腹腔约1—2分钟,以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞.
,置一洁净试管内。ﻫ5。用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡),吸取一滴滴于载玻片上,加盖玻片镜检。ﻫ6。 观察结果,也可以将腹腔液涂片,平放于湿盘内,37℃,孵育30 ,用预温的PBS冲洗3次,然后用甲醇固定1分钟, 2份混匀后,滴于涂片上染色5-10分钟,以蒸馏水冲洗(切勿先将染液倾去)后,待干,镜检。ﻫ7. 实验结果
观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象,计算吞噬百分比,即每100个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示,即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100,.
注意事项
1。充分揉搓腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来。
2。用尖吸管吸取腹腔液时,尽量避开腹腔脏器,避免损伤血管引起出血,影响实验结果。ﻫ3. 用瑞氏染液染色时,切勿先将染液倾去后再冲洗,以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度。
文中如有不足,请您指教!
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