鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制.pdf

鱼类
嬲蛾必聊擀荪钔学位论文作者签名:章《事·季宋任蕾学位论文版权使用授权书独创声明ⅲ霍鹨胖被亢9倚妥黯奎拦互窒蚱渌逃沟难换蛑な槭本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签字同期:≯。年哆月药日本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者签名:
鱼类淋巴囊肿病毒胶体金免疫层析试纸条的研制捅要鱼类淋巴囊肿病琇且恢值湫偷钠し艉颓潮碜织慢性病毒性疾病,其呈世界性分布,可感染已知至少科忠陨系暮K半咸水和淡水鱼类,是对鱼类危害较为严重的病毒病之一。鱼类淋巴囊肿病病原为淋巴囊肿病毒琇。目前的检测方法主要是组织病理技术、电镜技术、细胞培养技术、免疫检测技术和分子检测技术等。这些检测方法在准确性、灵敏性、安全性和花费等方面有各自的优点,但是它们不同程度上受到需要专业人员和复杂仪器的限制。胶体金免疫层析技术具有快速、简便、结果直观等特点,而单克隆抗体技术具有良好的特异性和灵敏度,本论文将两者结合旨在建立克服上述局限性的鱼类胶体金免疫层析试纸条。将攴置谛∈罂筁夷さ鞍椎タ寺】固单抗脑咏涣鱿赴、┐笈嘌⒏骨蛔⑸銪痗小鼠制备抗腹水单抗。,纯化后的单抗经甈治觯琁重链和轻链区带明显,蛋白纯度较高,适合检测和胶体金的标记;分析抗单抗的抗体类型,甑タ咕粲贗类;免疫荧光实验和斑点免疫印迹实验表明甑タ固匾煨缘赜隠岷希患浣覧实验测得腹水单抗男Ъ鄯直鹞#::幌嗉覧实验进行抗原表位分析,结果显示甑タ故侗鸩煌目乖砦弧Mü治霾舛ǖタ沟抗体类型、特异性、效价和抗原表位,选择抗体类型是唷⑻匾煨院谩⑿Ъ较高、识别不同抗原表位的单抗直鹩米鞑痘窨固搴捅昙强固濉采用双抗体夹心原理制备鱼类胶体金免疫层析试纸条。以微波炉作为加热容器,利用柠檬酸三钠还原法制备了粒径大小约为单分散系的胶体金。肉眼观察制备的胶体金呈红色,紫外可见光谱分析和透射电镜观察胶体金颗粒分布均匀、大小一致。通过探索胶体金与单抗的最佳标记条件,确定胶体金与单抗的标记值为,稳定胶体金的单抗标记用量为/。以最佳标记值和最佳标记蛋白量对胶体金进行单抗标记,紫外可见光谱分析和透射电镜观察胶体金吸附上单抗,经免疫渗滤法鉴定制备的金标抗体具有良好免疫活性。将金标抗体喷涂于玻璃纤维膜上制成金标垫,单抗脱蚩剐∈驣抗
觢的提取液进行检测,可以加S憷郘禾褰鹈庖卟阄鍪灾教跤氚叩体分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线制成膜检测层,与样品垫、吸收垫和塑料底板组装成鱼类胶体金免疫层析试纸条。对其进行了优化实验,筛选出合适的鱼类胶体金免疫层析试纸条制作材料。确定了金标抗体的最适稀释倍数为,单抗脱蚩剐∈驣抗体的最适包被浓度分别为用鱼类胶体金免疫层析试纸条检测样品,若待测样品中含有,膜上检测线和质控线显示肉眼可见的红线,若待测样品中无则只在质控线出现红线,整个反应过程可在谕瓿伞S憷郘禾褰鹈庖卟阄试纸条对细胞上滴度是检出的量为.’免疫印迹法、斜冉希觳饬槊舳纫恢隆1韭畚难兄频挠憷郘体金免疫层析试纸条具有快速、简便、准确、结果直观的特点,为鱼类的快速检测提供了一种实用的方法。关键词:淋巴囊肿病毒;单克隆抗体;胶体金;免疫层析/和/。鱼类淋巴囊肿病毒胶体金免疫层析试纸条的研制
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