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ChinaPharmacist
ISSN1008-049X,CN42-1626/R
《中国药师》网络首发论文
题目:UPLC-MS/MS法测定人血浆中的醋酸甲地孕酮
作者:石玲子,刘娟,杨姗姗,吴强
收稿日期:2022-07-06
网络首发日期:2022-10-08
引用格式:石玲子,刘娟,杨姗姗,-MS/MS法测定人血浆中的醋酸甲地孕
酮[J/OL].中国药师.
.
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网络首发时间:2022-10-0812:15:46
网络首发地址:.
UPLC⁃MS/MS法测定人血浆中的醋酸甲地孕酮
石玲子刘娟杨姗姗吴强(四川省药品检验研究院国家药品监督管理局药物制剂体内相关性技术研究重点实验

室成都)
611731
摘要目的:建立超高效液相色谱串联质谱法()测定人血浆中醋酸甲地孕酮的浓度。方法:采用蛋白沉淀
⁃UPLC⁃MS/MS
法预处理血浆样本,沉淀剂为甲醇。采用色谱柱(,),流动相为含甲酸和
×%
·-1乙酸铵的水溶液,流动相为甲醇,梯度洗脱,流速·-1,柱温,进样量。结果:醋酸甲地孕酮
℃1μl
的线性范围为·-1;定量下限为·-1;批内精密度RSD均,批间精密度RSD均;醋酸甲地
1~≤%≤%
孕酮的提取回收率。结论:所用方法简便快速、准确度高、灵敏度好,适用于测定人血浆中甲地孕酮的浓度。
≥%
关键词孕激素;醋酸甲地孕酮;超高效液相色谱串联质谱法;人血浆;蛋白沉淀法
⁃
中图分类号:文献标识码:
A
DeterminationofMegestrolAcetateinHumanPlasmabyUPLC⁃MS/MS
ShiLingzi,LiuJuan,YangShanshan,WuQiang(SichuanInstituteforDrugControl,NMPAKeyLaboratoryforTechnicalResearch
invitroinvivo
onDrugProductsandCorrelation,Chengdu611731,China)
ABSTRACTObjectiveMethods
:ToestablishaUPLC⁃MS/MSmethodfordeterminingmegestrolacetateinhumanplasma.:The
(×,
-1
).%aqueousformicacidcontaining10mmol·Lammoniumac⁃
-1
·minwiththecolumntemperatureat40℃,and
Results-1-1
.:Thestandardcurvewaswithintherangeof(1⁃400)ng··ml.
RSDsRSD
Alltheofintra⁃%,andallthesofinter⁃%.
Conclusion
%.:Themethodiseasy,rapid,⁃
ablefordeterminingmegestrolacetateinhumanplasma.
KEYWORDS
Progestin;Megestrolacetate;UPLC⁃MS/MS;Humanplasma;Proteinprecipitation
醋酸甲地孕酮为合成的孕激素可与雌激素配内标醋酸甲地孕酮
,%),⁃d3(TLCPharmaceutical
伍制成各种剂型的避孕药还可用于治疗痛经闭批号化学纯度同位素
,、standard,:3835⁃013A1,%,
经功能性子宫出血子宫内膜异位症等疾病亦可纯度甲醇批号色谱纯甲酸批
、、;%)。(:197159,),(
用于子宫内膜腺癌和乳腺癌及其他癌症的治疗可号色谱纯乙酸铵规格批号
;:194213,),(:50g,:
明显提高患者的生命质量[1]研究表明醋酸甲地色谱纯均为提供纯水为
。183355,),Fisher。Milli⁃Q
孕酮联合化疗对晚期卵巢癌患者临床疗效显著能的超纯水仪制得研究所用的空白血浆
,Z00Q0V0T0。
降低血管内皮生长因子基质金属蛋白酶水平及全血由山东省聊城市人民医院提供溶血空白血
、⁃2,;
改善患者晚期症状且无严重不良反应安全性良浆高脂空白血浆为课题组采用空白血浆自制
,,、。
好[2]由于醋酸甲地孕酮在计划生育和临床治疗2 方法与结果
。
中的重要意义建立醋酸甲地孕酮的血药浓度测定试验条件
,
方法用于临床血药浓度监测及药物动力学研究指色谱条件采用色谱柱
,, WatersBEHC18
导合理用药是非常有必要的本文建立了简便快速流动相为含甲
。(×,),%
的超高效液相色谱串联质谱法法酸含-1乙酸铵水溶液流动相为含
⁃(UPLC⁃MS/MS)(10mmol·L),B
测定人血浆中醋酸甲地孕酮甲醇梯度洗脱
。,(0~,70%B→90%B,~
1 仪器与试药
,90%→90%B,~,90%B→40%
日本岛津超高效液相色谱仪美国
LC⁃30AD,B,~,40%B→40%B,~,
质谱检测仪热电低温流速为-1柱温为
SCIEXTQ5500,SORVALL8R40%B→70%B)。·min,
离心机热电低温冷冻冰箱醋酸甲地孕酮对照品自动进样器温度为进样量为
,。40℃,8℃,。
批号纯度质谱条件离子源正离子模式
(TLCpharmaceuticalstandard,:3276⁃032A1, ESI,,MRM
通信作者:吴强
Tel:********** E⁃mail:******@
1
监测离子喷雾电压为气帘气为结果表明内标和待测物均不相互干扰
;5500V,40si,%。。
和均为离子源温度待测物和内线性关系考察
GS245psi,550℃,
标的去簇电压均为碰撞电压分别为临用前以比例将工作液与空白血浆混匀
100V,25,1∶19
醋酸甲地孕酮和内标的监测离子分别为m/z即得血浆标准曲线样品血浆标准曲线范围均为
21V。。
和m/z-1用加权线性回归方法计
→→。~·ml。

=0089408+0001021,=
取醋酸甲地孕酮对照品及内标适量用甲醇溶权重系数为/C2每个分析批标准曲线均符合
,(1),
解得醋酸甲地孕酮内标贮备液浓度均为接受标准相关系数r大于
,、,,。
-1储存于冰箱中精密量取醋酸甲地孕准确度和精密度、定量下限
·ml,-20℃。
酮贮备液适量用甲醇逐级稀释得浓度分别临用前以比例将工作液与空白血浆混匀
,50%,1∶19
为-1的标准曲线即得定量下限低浓度几何中浓度中浓度与高
1,2,8,20,80,160,320,400ng·ml、、、
工作液和-1的质控工浓度血浆质控样本
1,3,30,100,300,600ng·ml(LLOQ、LQC、GMQC、MQC、
作液精密量取适量内标贮备液用甲醇稀浓度分别为
。,50%HQC),,,,,
释得-1内标工作液-1每个浓度个重复经预处理后
,20ng·ml。·ml,6。
血浆样本预处理进样检测个不同分析批次的准确度和精密度定
3。
取血浆样本于孔聚丙烯板中加入量下限的偏差在以内其余点的偏差在
50μl96,±%,
上述内标工作液涡旋混匀加入甲醇以内见表
20μl,,280μl,±%,1。
混匀提取后于g离心取表醋酸甲地孕酮血浆样品的精密度准确度考察结果
,4℃、2120×10min,100μl1 、
上清液至新的孔聚丙烯板加入甲醇浓度精密度准确度偏差
96,50%(CV%)(%)
涡旋混匀后封膜得血浆样品-1批内最大值批间批内范围批间
200μl,(175℃,3s),(ng·ml)()()
-~-
。
-~--
-~-
分别取个不同批次来源空白血浆各
6()50μl,-~--
-~
3,50%
醇溶液外其余同项下操作制得选择基质效应
20μl,“”,
性考察空白血浆样本另取份空白血浆各正常空白血浆的基质效应取个不同批
。 6
分别加入标准曲线定量下限工作液次来源的正常空白血浆作为空白样本分别提取
190μl,10μl()
-1混匀后从每个血浆取份样本每份后向该空白样本提取物中添加待测物和内标制得
(1ng·ml),3,,
各按照项下方法操作制得选择性考察低中高浓度质控样本每个浓度水平每个批次
50μl,“”,、、(、
定量下限样本待测物对内标的干扰通过测定空空白基质个重复作为基质效应样本制备与
。:3),。
白血浆中只添加醋酸甲地孕酮不添加内标时的定上述测试样品低中及高浓度具有相同待测物及
、(、)
量上限浓度样本来评估醋酸甲地孕酮对内标的干内标浓度纯溶液不含基质成分作为参比样本每
()(
扰内标对待测物的干扰通过测定空白血浆中只个浓度个重复比较基质效应样品与参比样品
。:3)。
添加内标不添加醋酸甲地孕酮时的样本来评价内中待测物的比值得到待测物基质因子并用内标的
、,,
标对醋酸甲地孕酮的干扰基质因子进行校正计算低中高浓度样品内标归
。,、、
结果空白血浆空白血浆醋酸甲地孕酮内一化基质因子均值为分别为
、++,,,CV%
标给药后血浆样本的色谱图见图醋酸甲地孕说明基质效应在各浓度间无
、1。%,%,%。
酮和内标的保留时间分别约为明显差异不影响测定结果
、。,。
在个不同来源空白血浆样本的醋酸甲地孕酮溶血空白血浆及高脂空白血浆的基质效

m/z通道中与醋酸甲地孕酮保留应用溶血血浆及高脂血浆分别配制低中高浓度
(→), 、、
时间相同处响应的平均峰面积均小于用同批空白血血浆质控样品每个浓度个重
(LQC、MQC、HQC)(3
浆制备的定量下限样本中醋酸甲地孕酮平均峰面积复用正常血浆新鲜配制的标准曲线回算样品浓
),
的而在内标m/z通道中与度计算浓度与理论浓度的偏差及RSD低中高
%;(→),,。、、
内标保留时间相同处的平均峰面积均小于用同批空浓度血浆质控样品的溶血基质效应结果为
-%
白血浆制备的定量下限样本中内标平均峰面积的
~-%,-%~-%,-%~%,CV%
2
空白血浆空白血浆醋酸甲地孕酮内标给药后血浆样本
A. B.++ C.
醋酸甲地孕酮内标
1. 2.
图1 空白血浆、空白血浆+醋酸甲地孕酮+内标、给药后血浆样本的色谱图
3
-
为低中高浓度血浆质控样孕酮或其他色谱行为相近的化合物[24]很有可能
%,%,%。、、,
品的高脂基质效应结果为无法消除基质效应影响分析结果的准确性本文
-%~-%,,。
为在保证灵敏度定量下限为-1的同时将
-%~-%,-%~-%,CV%(1ng·ml),
结果表明溶血及高脂血浆对进样体积降低为降低基质对测定的影响同
%,%,%。1μl,。
测定无影响时采用同位素内标因同位素内标与分析物的保留
。,
提取回收率时间基本一致在分析过程中能有效降低或消除基
,
配制低中高浓度血浆质控样品质效应在本试验中醋酸甲地孕酮低中高浓度血
、、(LQC、MQC、。、、
每个浓度个重复经预处理后进样另将浆样品基质效应为经过同
HQC),6,。%,%,%,
空白血浆提取后向该空白基质提取物中添加待测位素内标的基质效应进行校正后即醋酸甲地孕酮
,,
物和内标配制同浓度的低中高浓度样品作为参的基质效应结果除以内标的基质效应结果内标归
、、:
比比较两组样品峰面积考察回收率低中高浓一化基质效应因子均值为比值均接
。,、、、、,
度样品回收率为分近于表明本文采用同位素内标将基质对醋酸甲
%,%,%;CV%1,
别为待测物提取回收率均大地孕酮的影响予以消除
%,%,%。。
于醋酸甲地孕酮属于生物药剂学分类类药物
50%。Ⅱ,
稀释因子口服生物利用度非常低且很大程度会受到食物的影

验证稀释因子即倍稀释制备浓度响在餐后试验中C与AUC会显著地提高因此
(1/4,4),,max。
超过定量上限的稀释质控-1有研究推荐在餐后服用醋酸甲地孕酮药物[5,6]在
(DQC,600ng·ml)。
样本以空白血浆倍稀释该稀释样本使稀释后样生物等效性评价及药物动力学研究中餐后试验是
,4,,
本的浓度在标准曲线线性范围内稀释质控样本测必要且必须的本文建立的方法对高脂血浆基质效
。。
定浓度平均值与理论浓度的比值为应考察结果表明高脂血浆对测定结果无影响
%~。
为说明样品稀释倍结果
%,CV%%。4参考文献
可靠
。
稳定性考察胡玉钦杨燕燕康昆等健康受试者口服大剂量国产醋酸甲地
1 ,,,.
孕酮的药代动力学中国现代应用药学杂志
血浆样品稳定性考察均采用低高浓度血浆质[J].,2002,18(7):2⁃4
、姜庆玲夏明林甲地孕酮联合化疗治疗晚期卵巢癌临床观察
控样品每个浓度重复次考察了全血样品室温2 ,.
,6。中国药师
[J].,2019,22(6):1096⁃1099
于黄光和白光分别放置血浆样品于室温黄光和胡玉钦杨燕燕康昆等法测定人血清中醋酸甲地孕
2h、3 ,,,.RP⁃HPLC
白光条件下分别放置血浆样品前处理后于自酮浓度解放军药学学报
24h、[J].,2000,16(5):272⁃274
动进样室内放置人血浆样品在和
8℃55h、-70℃4 SeoJH,ParkJS,JoMH,⁃MS/MS
条件下次冻融循环人血浆样品在和
-20℃5、-70℃methodfordeterminationofmegestrolacetateinhumanplasma:ap⁃
条件下保存进样室内重复进样次的稳plicationtoahumanpharmacokineticstudy[J].BiomedChromatogr,
-20℃7d、4
定性结果表明在上述条件下测定浓度与理论浓2013,27(4):409⁃415
。,
度准确度偏差均表明稳定性良好5 LiF,ZouXJ,ZhengH,⁃MS/MSmethodfordetermination
≤±15%,。ofmegestrolinhumanplasmaanditsapplicationinbioequivalence
3 讨论
study[J].JHuazhongUnivSciTechnologMedSci,2013,33(6):
多数文献采用液液萃取预处理血浆样品测定血912⁃916
-
浆中醋酸甲地孕酮[24]本文以孔板甲醇沉淀蛋6 LiY,SongCK,KimMK,
,96
白法方法简单便于操作采用法测forimprovedoralbioavailabilityandreducedfoodeffect[J].Arch
,,UPLC⁃MS/MS
定血浆中醋酸甲地孕酮的浓度分析时间仅为PharmRes,2015,38(10):1850⁃1856
,7 KimYH,ChoiHY,JinS,
可实现大通量的生物样品分析在生物样
,。twoformulationsofmegestrolacetateunderfedconditionsinhealthy
品质谱的测定过程中基质效应减少和消除是一直亟volunteers[J].ClinTher,2015,37(2):439⁃447
收稿修回
待解决的问题文献采用的内标为结构类似物甲羟(2022⁃07⁃06 2022⁃08⁃10)
。
4