奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明FudanUniversity.doc

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奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明
本内容主要分为以下几个章节:
一、明场方式的使用说明
二、相差方式的使用说明
三、微分干预(DIC)方式的使用说明
四、荧光方式的使用说明
五、软件的有关使用说明
六、图片组合的使用说明
七、图像拼接的使用说明
八、景深扩展的使用说明
九、时间序列的使用说明
十、保护与养护
注:荧光开关是桔黄色荧光笔标明。拷贝数据请用新的光盘。
一、明场方式的使用说明
;
,并调理光强旋钮以获取适合的光强;
,并将聚光镜上的调理环D转至5号位即BF;
;
%目镜或50%相机和50%目镜的位
置;
,获取清楚的明场图像。
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二、相差方式的使用说明
;
,并调理光强旋钮以获取适合的光强;
,选择4X,10X,20X,40X中的一个物镜,并将聚光镜上
的调理环D转至相应的号位(4X物镜用PHL;10X和20X物镜用PH1;
40X物镜用PH2);
;
%目镜或50%相机和50%目镜的位
置;
,获取清楚的相差图像。
三、微分干预(DIC)方式的使用说明
;
,并调理光强旋钮以获取适合的光强;
;
,并将聚光镜上的调理环D转至4号位;
;
;
%目镜或50%相机和50%目镜的位
置;
,获取清楚的微分干预图像。
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四、荧光方式的使用说明
,调理光强旋钮至最弱,并关
闭显微镜机身前B按钮(假如不再使用明场方式察看,请将明场光源A
封闭);
,即桔黄色荧光笔标明;
,接着翻开SHUTTER开关B;
,将荧光滤色块F转至1、2、3、6中的一个号位;
(再按压一次即会封闭),
并旋转圆按键C调理荧光光强;
%目镜或50%相机和50%目镜的位
置;
,获取清楚的荧光图像。
五、软件的有关使用说明
,将光路切换杆调至100%相机地点;
;
,第一在摄像控制工具窗口中切换相机芯
片为“彩色模式”即出现红绿蓝条纹按钮,此时相机自动切换为彩色
芯片进行明场图像采图;
“及时察看”对样品进行预览,随后在摄像控制工具
窗口中将曝光模式调理为“自动”,最后将曝光模式调理到“手动”,
经过增添或减少曝光时间来获取满意的察看成效;
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,能够在摄像控制工具窗口中履行白均衡操作,点击“白均衡”后框选预览图像中样品以外的背景地区,即可履行白均衡;
,调理摄影的分辨率后点击“摄影”即可达成对当
前预览图像的及时摄影,对该图像另存到指定文件夹,图像默认保存格式为“TIF”格式。
,将光路切换杆调至100%相机地点;
;
,第一在摄像控制工具窗口中切换相机芯片为“灰度模式”即黑白渐进按钮,此时相机自动切换为黑白芯片进行荧光图像采图;接下来勾选高级荧光模式“SFL”;
“及时察看”对荧光图像进行预览,将曝光模式调理为
“自动”,依据荧光表达的强弱,能够将曝光模式切换到“自动”,
经过增添曝光时间来使得荧光表达更亮,反之亦然;若调理曝光时间
超出1s,能够适合调高“增益”值(默认是1,能够调理到2)来使得
更短的曝光时间达到同样的荧光明度;
,能够履行黑均衡操作,点击
“黑均衡”后框选预览图像中荧光样品以外的背景地区,即可履行黑
均衡;
,调理摄影的分辨率后点击“摄影”即可达成对当
前预览图像的及时摄影,随后点击“图像”>“印入信息”>并选择
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“是”以后再对该图像进行保存,这样荧光图像为彩色,不然是黑白颜色的图片;图像默认保存格式为“TIF”格式。
标尺的增添
假如要在软件上显示并保存标尺信息,可在进行图像预览时点击“视图”>“标尺”,标尺就会在图像上显示出来;
随后点击“摄影”,摄影达成后,再点击“图像”>“印入信息”>并选择“是”以后再对该图像进行保存,标尺信息就会印在该图像上;
假如改变标尺格式可选“工具”>“选项”>“标尺”。
六、图片组合的使用说明
荧光图片的组合
多通道荧光自动叠加
将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;
选定“自动办理”选项;
单击“多通道”按钮,按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充分浅黄色的背景;
单击增添通道按钮,上下文菜单随即被翻开;该上下文菜单中将
列出所有目前软件设置的观察模式(FUW、FBWA、FGW、CY5等荧光观察模式);
,比如蓝色“FUW”,随后单击第一个
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色彩通道旁边的小加号,激活目前蓝色通道,并按软件提示将滤色块
转盘转至1号位;
“摄像控制”工具窗口,点击“及时察看”
对荧光样品进行曝光时间及增益值进行调理,达到一个最正确的察看效
果;而后切换至“流程管理”工具窗口,单击读取设置按钮,将最正确
察看成效时的曝光时间及增益值读取到目前所激活的荧光通道;
-6步,增添想要与目前已激活通道(例:
蓝色通道)组合的其余荧光通道;
,单击开始按钮,随后软件中会提示你切
换滤色块的指令,每当你依据软件提示切换一个滤色块,相机就拍一
张荧光图像,指令提示完成后,软件自动将不一样通道下拍摄的多张荧
光图像进行荧光叠加,图像窗口中将显示所有通道的叠加荧光图像;
,默认的文件保存格式为
“TIF”格式。
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多通道荧光手动叠加
多通道图像:用黑白相机芯片所拍出的荧光图像,该图像在软件
中已默认增添并使用了相应通道的伪彩色,此时图像模式为“多通道,
位图像”。
鼠标选中随意一张多通道图像文件名后,点击图像>组合通道,组合通道对话框随即翻开;
选中的多通道图像将作为第一色彩通道被自动输入到图像列表中,组合通道对话框中显示出目前色彩通道图像的预览图像;
在下一可用行中,单击图像单元格。随即会出现一个可用图像的文件名列表,表中包括所有的可用图像。此时从表格中单击选中另一可用多通道图像后,组合通道对话框中立刻显示组合好的预览图像;
在列表里鼠标选中任一色彩通道图像文件名,可进行该通道色彩亮度值的调理,增添该色彩通道的权重;若有必需,使用像素偏移组中的箭头按钮,设定X/Y的偏移值,也能够有关于相互挪动单幅图像。随后单击“确立”按钮,创立一个包括多个荧光通道的新多通道图像,该图像模式为“多通道,16位图像”;
点击文件>另存为命令保存新的多通道图像,保存图像时,请一直使用TIF文件格式。
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明场图片与荧光图片的手动叠加
透射图像:用彩色相机芯片所拍出的图像,此类图像模式为“RGB,
8位图像”。透射图像不用拥有与单张荧光图像同样的图像种类,不
过透射图像的位深要与荧光图像一致。
鼠标选中透射图像文件名后,点击图像>模式,将模式里的位深从“8位图像”改正为“16位图像”;
鼠标选中该透射图像文件名后,点击图像>组合通道,组合通道对话框随即翻开,随后在透射列表中选择该透射图像,组合通道对话框中显示出目前透射图像的预览图像;
在图像列表单元格中单击一次,将获取包括能够与所选透射图像
组合的所有多通道荧光图像文件名的取值表。选择所需荧光图像(能够选择一张或一张以上的多通道荧光图像),选择达成后组合通道对话框中立刻显示将“多通道图像与透射图像”组合好的预览图像,随后单击“确立”按钮创立新图像文档,该图像文档为拥有两个图像层的多层图像;
点击文件>另存为命令保存新的多层图像。保存图像时,请一直使用TIF文件格式。
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七、手动图像拼接的使用说明
将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;
选定“手动办理”选项;
“手动图像拼接”按钮,按钮将显示为已点击状态,此时该
按钮内部的充分浅黄色的背景;
“自动对齐”按钮显示为已点击状态;
,单击开始按钮,软件将切换到及时察看模式,对样品聚焦清楚后,能够挪动载物台使得从样品的左上角出此刻视线里;接下里单击某个箭头按钮可设置要将下一幅图像摆列在目前图像的哪一侧;
当你点击箭头时,软件会自动收集目前的样品图像出现出此刻图像窗口里,而该收集图像右边会出现目前的及时图像,经过挪动载物台使得及时图像中样品的右上角部分与收集好左上角的图像重合;随后点击箭头时,目前样品左右两部分重合好的图像会被收集,随后在该收集图像下方会出现目前的及时图像,经过挪动载物台使得及时图像中样品到右下角部分和收集好的图像重合;挨次频频,直至一个完好的样品被完好拼出,点击“停止”;
将已拼接好的的图像另存为指定文件夹,默认的文件保存格式为
“TIF”格式。
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八、手动景深扩展
将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;
选定“手动办理”选项;
单击“即时扩展景深”按钮,按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充分浅黄色的背景;
明场图像做景深扩展时选择透射(指数/二次函数),荧光图像做景深扩展时选择反射(指数/二次函数);
在流程管理工具窗口中,单击开始按钮,此时图像窗口下方右边画面即为目前的样品焦面的及时图像,而图像窗口下方左边画面显示即为目前焦面上的样品信息,迟缓微调过程中,挨次达到样品不一样的焦面,等使用微调机构从样品的下焦面走到上焦面后,图像窗口下方左边画面里会把不一样焦面上所有的样品信息完好积累记录;而在图像窗口上方会自动生成一张把不一样焦面样品信息叠加后的图片,随后单击停止按钮,图像窗口会生成一张叠加好所有清楚的图片;
>另存为命令保存新的图像。保存图像时,请一直使用
TIF文件格式。
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