cck8初学问答.doc

DOJINDO Q&A
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当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔(100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔(100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%K-8溶液。
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可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液,K-8体积太少,K-8溶液稀释1倍,然后加入培养基体积20%的量。
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可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。
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不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
K-8与胸苷结合检测之间是否有相关性?
有。然而,K-8使用的检测原理与胸苷检测的不同,因此结果可能不同。
K-8能否检测细菌细胞?
,但不能检测酵母细胞。向100 μl K-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。
K-8稳定吗?
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月,在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存,我们推荐-20℃的储藏条件。
nm的滤光片,还可以使用哪些其他滤光片?
还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。
-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?
K-8试剂并混匀后加样。
K-8是什么颜色?
应该是粉红色。若颜色不一样,有可能会影响测定。
K8能否对活细胞进行染色?
不能。K8的主要成分是一种水溶性的四唑盐(WST8),并通过电子载体1Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的,K8不能对细胞进行染色。
K8检测溶液对细胞是否有毒?
CCK8溶液自身因为高浓度的1Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是,K8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。K8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。K8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,K8培养后的活力。
,药物对测定是否有影响?如何解决?
有时会有影响。如果药物具有还原性,K8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,K8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK8)的吸光度高,则证明药物有影响,K8之前更换培养基,去掉药物的影响。
,是什么原因?如何解决?
可能会有以下几个原因: 1. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2. K8沾在壁上而产生误差,K8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000100,000个/孔范围内摸索条件。
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K8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收