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溶血的检验
酸化血清溶血试验
一、原理:酸化血清溶血试验,也称Hamtest。阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者体内存在对补体敏感的红细胞,即红细胞在酸性(~)的正常血清中孵育,补体被激活,PNH红细胞破坏而产生溶血。而正常红细胞不被溶解,无溶血现象。如血清经56℃加热30分钟,使补体灭活,患者红细胞即不被溶解。
二、参考范围:健康人:阴性。
三、临床意义:阳性主要见于PNH,敏感度较低,有30%以上患者呈阴性反应。自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性。
蔗糖溶血试验
一、原理:根据PNH患者的红细胞,在低离子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强,经孵育后可使补体与红细胞膜结合加强,蔗糖溶液进入补体敏感的红细胞内,导致渗透性溶血。
二、参考值:定性试验:正常为阴性;定量试验:正常溶血率<5%.
三、临床意义:
PNH患者为阳性或溶血率增加,可作为PNH的筛选试验。部分自身免疫性溶血性贫血患者可为阳性,白血病、骨髓硬化时可出现假阳性。
抗人球蛋白试验
一、原理:抗人球蛋白试验(Coombs试验)检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体(IgG)。分为检测红细胞表面有无不完全抗体的直接抗人球蛋白试验(DAGT)和检测血清中有无不完全抗体的间接抗人球蛋白试验(IAGT)。直接试验应用抗人球蛋白试剂(抗IgG、IgM、IgA和(或)抗C3)与红细胞表面的IgG分子结合,如果红细胞表面存在自身抗体,出现凝集反应。目的是检查红细胞表面的不完全抗体。间接试验应用Rh(D)阳性O型红细胞与受检血清混合孵育,如血清中存在不完全抗体,红细胞致敏,再加入抗人球蛋白血清,可出现凝集。
二、参考范围:健康人直接和间接抗人球蛋白试验均阴性。
三、临床意义:
自身免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血和血型不合引起的输血反应、药物性免疫性溶血、冷凝集素综合征、阵发性冷性血红蛋白尿等直接抗人球蛋白试验阳性,当抗体与红细胞结合后,有过剩抗体时直接和间接试验均阳性。
红细胞寿命测定
原理:红细胞寿命测定将标记放射性核素的红细胞注入血循环后,逐日观察其消失率,记录成活曲线,计算出红细胞寿命。
参考范围:半寿期25-32天
应用评价:
:红细胞寿命缩短,约为14天。
:红细胞寿命缩短,约为15-29天。
血浆游离血红蛋白检测
原理:血红蛋白可催化过氧化氢释放新生态氧,使邻苯氧化为蓝紫色。根据显色深浅,与同时测定标准血红蛋白液对照,可测出血浆游离血红蛋白的量。
参考范围:0-40mg/L
应用评价:
。蚕豆病、PNH、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、溶血性输血反应等明显增高;自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。
、红细胞膜缺陷不增高。
血清结合珠蛋白检测
原理:血清结合珠蛋白检测(Hp)是在待测血清中加入一定量的血红蛋白液,使之与待测血清中的结合珠蛋白形成Hp-Hb复合物。通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的Hb分开,测定Hp-Hb复合物的量,可测得血清中结合珠蛋白的含量。
参考范围:-
应用评价::常见于各种溶血,尤其是血管内溶血。严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明显减低,此时不能以此指标判断有无溶血。
:常见于感染、创伤、SLE、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠、胆道阻塞等(Hp为急性期反应蛋白)。此时如Hp正常,不能排除合并溶血的可能。
血浆高铁血红素白蛋白检测
原理:血浆中游离的血红蛋白可被氧化为高铁血红蛋白,再分解为珠蛋白和高铁血红素,后者先与血红蛋白结合,血红蛋白消耗完后,再与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白,与硫化铵形成一个易识别的铵血色原,用光谱仪观察结果,于绿光区558nm处有一最佳吸收区带。
参考范围:阴性
应用评价:血管内溶血时,血浆中游离血红蛋白大量增加,血浆中可检测出高铁血红素白蛋白,血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标。
尿含铁血黄素试验
实验原理:尿含铁血黄素试验又称Rous试验。当血红蛋白通过肾滤过时,部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞,并随尿液排出。尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体,其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下产生普鲁士蓝色的亚铁氢化铁沉淀。尿沉渣肾小管细胞内可见直径1~3um的蓝色颗粒。
参考范围:健康人为阴性。
应用评价:Rous试验阳性提示慢性血管内溶血,尿中有铁排出,无论有无血红蛋白尿,只要存在慢性血管内溶血如PNH,本实验即成阳性,并可持续数周,但在溶血初期,虽然有血红蛋白尿,上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素,此时本实验可呈阴性反应。
尿卟啉检测
实验