TIMP3N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定初探.pdf

南京医科大学
硕士学位论文
TIMP-3N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定
姓名:朱自强
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:韩晓
20080602
日期:趟车姐』目专业:生塑焦堂生佥壬生堑堂作者签名:盏:圣童墨作者签名:聋互日期:┘迨萆ㄊ俏腋鋈论文独创性声明论文使用授权声明在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论导师签名:文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。南京医科大学硕士学位论文
私峁褂蛑刈橄俨《。但是,.。本课题拟构建与鉴定猅重组腺病毒载体,为以后深入研究甌对胰腺癌的作用奠定基础。另外,还拟构建与鉴定增强型绿色荧光蛋白珽重组腺病毒载体,作为重组腺病毒载体构建过方法分别将编码隕腄片段定向克隆至穿梭质粒,《,构建重组腺病毒载体猅与。分别将线性化的重组腺病毒载体转柒赴竦弥刈橄俨《。階狤I鲜鲋刈橄俨《,用半数组织培养感染剂量ḿ觳獾味取W詈螅刈橄俨《ü齏的方法检测私峁褂虻鞍椎谋泶铮约巴üü獾怪孟晕⒕导觳饴躺ü蛋白的表达。程中的系统阳性对照。.,,南京医科大学硕士学位论文
结果穿梭质粒鰈甆.—经过鉴定,被确认成功构建;。将上述重组腺病毒载体分别转染赴芄还察到细胞致病变效应,.重组腺病毒—最后,┫⒓觳獾侥康牡鞍椎谋泶铮R院笊入研究甌对胰腺癌的作用,以及探讨甌转基因治疗胰腺癌的关键词组织金属蛋白酶抑制因子..私峁褂颍增强型绿色荧光蛋白;,滴度分别达至/与/。可能性奠定了基础。南京医科大学硕士学位论文
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胰腺癌是世界上癌症患者死亡的第四大因素【】,其患者的甏婊率不足ィ⑶医昀锤么婊盥室恢泵挥械玫较灾奶醨高R认癌患者的低存活率主要归因于胰腺癌早期多发生局部侵袭,并且具有较高肿瘤的侵袭和转移,与细胞外基质的降解密切相关。而组织金属蛋白酶抑制因子抑制基质金属蛋白酶,韵赴饣实降解,进而抑制肿瘤的生长、侵袭和转移【。外基质相结合的成员⑶乙步鲇蠺能够诱导各种肿瘤细胞发生凋亡【刀。此外,.、,甊一选择素【】;⒀9苌捎胱R芠俊临床胰腺癌标本相关研究发现,.胍认侔┯凶疟冉厦芮械墓系。在.%的胰腺内分泌肿瘤中,.蛩诘湃旧宄臂区⑸任蝗笔乏。此外,还有研究显示在近%的胰腺癌中,.蛴捎谄淦舳忧虻母呒谆退奖泶铮的转移潜能【弧,,能够通过在母黾易宄稍校琓是唯一能够和细胞,幕钚浴;也能够抑制包刖舌南京医科大学硕士学位论文.‘.—
或者因为该基因的等位缺失而不表达。—。【】。因此,,其与细胞外基质的结合能力大大减弱,从而使得Ω镁哂易于扩散并且能够作用于更多肿瘤细胞的优势。总之,哂星痹诘挠盏家认侔┫赴蛲觯约耙种埔认侔生长、侵袭、血管生成与转移的功能。为高效的表达甌蛋白,本实验选择了腺病毒载体作为表达载体。与表达质粒相比,重组腺病毒载体能够保证猅在细胞中更为高效的表达,可以获得更好的细胞实验效果,并且能够用以构建移植甌转基因肿瘤细胞的动物肿瘤模型。,腺病毒载体还具有如下优点:可以插入大片段外源基因;可以高效地转导不同类型的组织细胞;可以转导分裂和非分裂细胞;在细胞培养物中有高滴度的重组病毒产量;