粗山羊草低分子量麦谷蛋白42KD亚基基因的克隆及序列探究.pdf

山东农业大学
硕士学位论文
粗山羊草低分子量麦谷蛋白42KD亚基基因的克隆及序列分析
姓名:许淼
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:王宪泽
20050520
导师签名:堕期:型。腭论文作者签名:≮垒鼗关于学位论文原创生和使用授权的声明以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。人承担。日
粗山羊草低分子量麦谷蛋白亚基基因的克隆及序列分析摘要谷蛋白是小麦蛋白的主要组成部分,低分子量麦谷蛋白约占谷蛋白总量的%,对小麦的营养品质和面粉加工品质起重要作用。由于其分子量差别较小且亚基数目较多,大多数低分子量麦谷蛋白亚基具有相似的迁移率,在甈泻苣逊挚#,所以描述这个多基因家族的峁购投嚯牧吹南晗附峁狗浅@选V钡侥壳拔止,尚未有由蛄型瞥龅陌被嵝蛄泻褪导蚀嬖谟谂呷橹械牡头肿量麦谷蛋白亚基完全对应的报道。因而与高分子量麦谷蛋白相比研究较少,且以前的研究主要集中在原始二倍体和四倍体硬粒小麦,本论文以山羊草属粗山羊草为材料,对其低分子量麦谷蛋白亚基的氨基酸序列、编码基因和空间结构进行了研究,主要结果如下:軬系羌堑脑夹÷蠛陀擦P÷笾械头肿恿柯蠊鹊鞍亚基基因两端的保守序列设计引物,以山羊草叶片为材料提取用椒ń心康幕虻睦┰觯呕┰龅姆从μ逑担掷氩⒓粗山羊革中编码偷白缘牡头肿恿柯蠊鹊鞍籽腔颉5到瞿康钠危浯笮≡谖。由基因序列推导出的低分子量麦谷蛋白亚基的氨基酸序列和胚乳中对应的氨基酸序列一致。邪被嵝蛄械腘端,撕椭馗葱蛄斜冉希琧端的序列是高度保守,其差别仅仅是单个残基的替换或缺失;┒说牡谝桓鯟残基不是在坏悖窃谄浜蟮闹馗葱蛄星颍馐谴搜腔胛颐浅<不同之处;重复序列的主要的重复单元为,重复次数为,重复单元不同和重复单元的插入和缺失是造成基因序列大小差山东农业大学硕士学位论文
异的主要原因。颐抢们叭搜芯慷蚣峁沟姆椒ǎ菸颐怯苫蛐蛄推导得到的氨基酸序列,模拟了这个的计算机二级结构模型。并且根据模拟得到的蛋白质模型,研究了虶残基在空间结构及小麦品质中的作用。关键词:低分子量麦谷蛋白;基因克隆;序列分析;谢簧窖虿菔山羊草属中低分子量麦谷蛋白咂基罐因的克隆与分析
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英文缩写符号及中英文对照表英文缩写中文名称英文名称碱基对十六烷基三乙基溴化铵半胱氨酸重蒸水二硫苏醇糖乙二胺四乙酸大肠杆菌麦谷蛋白谷胺酰胺异丙基一虼肴樘荌—狣—高分子量麦谷蛋白亚基曲培养基低分子量麦谷蛋白亚基甒甅磷酸缓冲液聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠—琀,缓冲液,珽瓾,珽撼逡篢琀,,’.籧籭·猤
把小麦胚乳贮藏蛋白的分类占小麦种子贮藏蛋白总量的%,其与面包的烘烤品质直接相关小麦是我国的第二大粮食作物,其种植面积仅次于水稻。小麦制品是我国人民的主要食品。山东省是我国小麦的主要产区,其产量约占全国产量的%,但是山东省的小麦育种与全国其他地方一样,九十年代以前偏重于产量的提高,忽视了品质的改善,致使山东省小麦育成品种中优质品种较少。随着人民生活水平的提高以及食品加工工业的迅速发展,对小麦加工品质的要求也逐步提高,生产中可利用的优质品种已远远不能满足食品工业的需求。为此,国家每年要花大量外汇进口优质小麦。另外,随着中国加入痓麦主要出口国的育种专家针对亚洲地区乇鹗中国和日本称范孕÷笃分实囊G笳鸩娇U褂泄匮芯抗ぷ鳎源蚩V国市场,因此研究和改良小麦品质关系到国计民生。根据在不同溶剂中溶解度不同,小麦种子贮藏蛋白可分为醇溶蛋白、麦谷蛋白、清蛋白、球蛋白等唷4既艿鞍装℅、ⅰ蕖⑺闹掷型,兹苡谝掖迹且恢种缓蟹肿幽诘亩蚣牡ヌ蛋白。而麦谷蛋白是以一种多聚体的形式存在,由分子间二硫键相连接,只有当降解成亚基时才能溶于乙醇。种子的贮藏蛋白与小麦的加工品质密切相关,尤其是这两种蛋白对面粉的烘拷品质和煮面品质具有重要作用。麦谷蛋白的分子量介于几千到几百万之间;,根据麦谷蛋白在还原性的中迁移率的不同,可将麦谷蛋白分为两类;高分子量麦谷蛋白亚基,偷头肿恿柯蠊鹊鞍籽腔。高分子量麦谷蛋白约壳岸愿叻肿恿柯蠊鹊鞍椎难芯咳找嫱晟啤瓽诼蠊鹊鞍字械暮吭对陡哂