利用RNAi技术分析拟南芥Ca2泵基因ECA1和ACA2的功能.pdf

内蒙古农业大学
硕士学位论文
利用RNAi技术研究拟南芥Ca<'2+>泵基因ECA1和ACA2的功能
姓名:朱炜
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:魏建民;吴忠义
20080501
摘要籎的转录产物比野生型有明显降低,且转基因株系之间差异明显,钙离子对植物的生长发育是至关重要的,植物细胞中的浓度是受严格控制的,植物对细胞内”浓度的调节依赖于定位在不同细胞器和质膜上的通道头醋T俗幕钚浴F裎V梗参镏幸延惺諧帽环泵。本试验采用技攵愿票没駿虯直鹕杓埔颬扩增得到特异片段,用此片段构建成载体:靥寰盖醒橹ふ泛螅捎酶┡└司花粉浸蘸的方法介导转化拟南芥。抗生素筛选及觳庵っ鞯玫阶;蛑株。对转基因植株后代进行卡那霉素抗性筛选等遗传分析,┳;蛑晗到蠷甈分析,:,且转基因株系之间差异明显。趌/;蛑晗涤胍吧途上,,生长受到抑制越大;在低.·蚋進·。关键词:泵;内质网型泵;自我抑制型泵;扇、泵现,分两种类型:内质网型畉妥晕乙制型术研究定位于拟南芥谥释系母票肊虯功能。主要结果如下:无明显区别。在低.。或高.·呐嘌一一狦—.籄籊:甀—狦—.狝籊—
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沉默删腞靥褰峁雇插图和附表清单钙离子泵的拓扑结构模式⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..植物细胞的钙离子运输途径一⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯.:⋯⋯⋯⋯作用机制⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.‘⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯,⋯⋯⋯⋯:.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..提取的拟南芥闹柿考觳狻┰霾顴。电泳图谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.┰霾顰:..电泳图谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.拿盖屑ā腜鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯拿盖屑ā一狝腜鉴定⋯⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..转虯拟南芥植株的筛选⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯转虯拟南芥植株的纯合体筛选.⋯⋯⋯⋯⋯转蛑晗礣。的觳猓骸转一狝蛑晗礣腜检测.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.总崛〉缬就肌载体一诱导基因沉默的半定量—治觥培养基上的生长情况⋯~⋯.比较转基因株系与野生型根的生长情况⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯..现在已知拟南芥的钙离子泵⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯载体—诱导基因沉默的半定量—。.’⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..
缩略语表览档腞聚合酶碱基对核糖核酸辕自我抑制型钙离子泵透评胱颖环匹阿磷酸扇转录后基因沉默双链小干扰盏嫉某聊春衔发夹聚合酶链式反应脱氧核糖核酸乙二胺四乙酸卡那霉素培养基光密度十二烷基硫酸钠猼——&
,除了文中特别加以标注和致谢婀地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献蚜巴在论文中作了明确的说。,:本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定,印:,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学,且导师为通讯作者,,’C苣谌莩,:柏,、∥
文献综述高等植物细胞中运输系统分,还是植物细胞中普遍存在的信号物质。作为胞内的第二信使,在植物对各种逆境信号的转导中起着重要作用@鏑侵参锵赴诘闹要组成成分,植物的合子、花粉管、茎尖、根毛、根极性的建立与极性的生长,都与细胞或组织内钙梯度建立有关。还有植物的向重力性,细胞分裂,细胞环流,渗透调节,离子运输,叶的昼夜节奏运动,以及植物在逆境胁迫下的伤害与适应等许多生理过程都受钙信使系统的调控【】。胞内钙梯度的存在是信号产生的基础。正常情况下植物细胞质中游离的静息态水平为。籱·左右,液泡中游离水平在’一~,胞壁是细胞最大的库,其浓度约为W罡呖纱~~,因而细胞壁等质外体作为胞外钙库,内质网、线粒体和液泡作为胞内钙库