BTB基因家族成员BTBD8、KLHL7和KLHL9的克隆和功能探析.pdf

後旦大学博士学位论文蚣易宄稍盉、和目寺『凸δ苎芯专姓指导教师:完成日期:遗传学研究所遗传学徐坚谢毅教授年院系:业:名:学校代码:学号:
摘要峁褂蚝蚹结构域都是在进化上高度保守的结构域,广泛存在于从酵母到人类的各种物种中。在人类基因组中发现了很多痥蛋白,提示这类蛋白功能的重要性和多样性。现在越来越多的实验证据证明痥蛋白在胞质分裂、细胞骨架功能维持、细胞周期调控、肿瘤发生、神经发育等重要生理过程中都起了重要的作用。峁褂虻闹饕9δ苁墙榈嫉鞍紫嗷プ饔茫和等转录因子的转录调控和参与介导的泛素途径中都有重要作用。鞍资墙昀捶⑾值囊焕嘈碌南赴羌芙岷系鞍祝梢杂隺细胞骨架作用从而对细胞骨架功能进行调控。更多的研究表明峁褂虻墓δ芏样化,参与了一系列重要的信号传导途径,在细胞周期调控和肿瘤发生中都发挥了重要作用。例如,研究发现疊可以与核骨架结构作用,并且疊受到淖B嫉骺兀跋霦/途径和揪丁—梢杂敕橇姿峄蛋白相互作用而影响神经元的细胞周期和分化,在脂肪细胞分化和结肠癌发生中也起了重要的作用。对人类蛋白的最新研究表明在乳腺癌的发生中起了重要作用,可以通过激活——等的表达对细胞周期进行调控。我们从本实验室的高质量人胎脑文库中克隆得到了三个含有峁褂虻新成员:和。⑶襅和焙衚—结构域。通过信息学分析发现我们得到的和腸全长形式,它们分别编码含有霭被帷个氨基酸和霭被岬牡白,并且都含有保守的峁褂蚝蚹结构域。通过杂交、—和原位杂交等实验,我们发现了它们各自特异的表达谱模式:种胎儿组织中广泛表达而在种成人组织中表达量都很低,这种表达模式提示可能在发育过程中起一定的作用:。诙嘀种琢鲎橹拖赴抵斜泶锊⑶以胰腺癌组织中表达量显著高于癌旁组织,提示其在肿瘤发生中可能起了重要作用;谔ザ巫橹斜泶锵灾哂诔扇烁巫橹崾驹谔ザ巫橹行惺一些重要功能。对这三个基因的细胞定位研究发现贏细胞中为细胞核定位而在细胞中为全细胞定位,提示在这两种细胞系中可能有不同的功能。而对蚄的定位研究发现它们的结构域对定位都有重要作用。利用免疫共沉淀实验我们确定了蚄都能与结合,提示蚄赡茉谖窒赴羌芄δ芎筒斡牍羌苄藕糯ǖ贾杏兄匾W饔谩复旦人学博上学位论义和蠭的功能研究
细胞实验结果表明榷ü泶锒訬南赴芷谟杏跋欤梢栽加细胞/诘谋壤跎賁期的比例,可能对细胞增殖有抑制作用。利用酵母双杂交筛选我们发现赡苡隡奘认赴贫种埔蜃及蛋白相互作用。蚘都是多效的信号传导调节分子,对细胞周期有调控作用。蚆及南嗷プ饔锰崾綤可能通过参与蚘的信号途径而对细胞周期产生影响。利用酵母双杂交筛选、实验和免疫共沉淀实验我们确定了能与活化的蛋白激酶芴相互作用。并且墓泶锟梢砸种韵赴芷诘难又妥饔茫焕么竿纷春嗣敢种芀细胞内源表达后对一认侔┫赴档闹芷谟醒又妥饔茫庑┙峁砻鱇可能起到促进细胞增殖的作用。隦相互作用提示赡懿斡隦稰和卜藕糯ǖ纪揪抖韵赴芷诤椭琢龇⑸跋欤盞也可能对斡氲男藕磐揪队械鹘谧饔谩和纳镅Чδ芑褂写钊研究,本文的研究结果为进一步阐明蚄基因在细胞周期调控网络中的作用提供了一些有益的线索。关键词:峁褂颉结构域、、⒔湍杆咏弧⑾赴定位、免疫共沉淀、锤头状核酶、、复日大学博上学位论文和椎墓δ苎芯
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英文缩略词,同源性检索工具泶镄蛄斜昵,欠肭⒎旁亩量,氨基酸谢,罨,基因表达串行分析人类基因组组织篋,地高辛猼,谷胱甘肽蛔R泼,磷酸盐缓冲液,多聚酶链式反应,逆转录嘧橹痗,多组织杂交膜郾0纺旱缬,细胞外信号相关激酶有丝分裂原激活蛋白激酶鞍准っ窩罨腜受体,巨嗜细胞移动抑制因子簍野彼一单加氧酶,色氨酸坏ゼ友趺傅鞍祝蠦结构域的蛋白衚结构域的蛋白:篟築篍:簅::篏篜—篜:篗篗:篍.,篜篗痶畉築簁—复旦大学博士学位论文和虻墓δ苎芯
第一章前言峁褂蜃钤缭诠和三个蛋白中发现因而得名,因为它也经常出现于痘病毒锌指蛋白中所以也称为峁域结构域是一个在进化上相当保守的结构域,从酵母到人的各个物种中都有鞍追植糩R话鉈蛋白都是在撕有一个峁褂颍负跻话氲腂蛋白同时在撕幸桓龌蛘呤嵌喔猺硗庖徊糠諦蛋白撕髦植煌男恐附峁褂以锌指为多斡胱B嫉骺亍T%的含锌指结构的转录因子中含有构域,它可与其它蛋白通过峁褂蛳嗷プ饔眯纬赏椿蛞煸炊厶濉A硗饣有一少部分鞍缀衅渌慕峁褂颍热鏔缸唇峁褂颍琣馗矗组蛋白折叠结构域,穿膜结构域,钩和其他未经研究的球状结构域。峁域最重要的功能是形成蛋白复合体。峁褂蛐纬傻鞍紫嗷プ饔玫慕缑妫ü峁褂颍梢孕纬傻鞍锥畚铮嗑畚铮部梢圆煌鞍紫嗷ソ岷闲纬梢炀蛋白复合体。开始认为鞍椎墓δ苁亲B家种埔蜃樱热鏩,,都已经证实是转录抑制的功能—。但是进一步的研究表明鞍滓部梢酝ü跃部核小体